博莱霉素致肺纤维化大鼠气道反应性的实验研究.pdfVIP

山西医科大学硬士学位论文 分钟。 7)o．01MPBS洗涤5次，每次浸泡2分钟，甩去多余液体。 品的前3-4孔有明显的梯度兰色，后3-4孔差别不明显)。 9)按每孔0．1ml依次加入TMB终止液，此时兰色立转黄色。 10)用酶标仪在450rim测定0D值，将TMB空白显色孔设为对照。 11)所有的标准品和样品的吸光值减去零孔的吸光值后，在坐标纸上画出曲线，以吸光 值作为纵坐标，以浓度作为横坐标。 12)根据样品的吸光值在坐标上找出对应的浓度。(注意：由于样品稀释了1倍，其实际 浓度应该为×2) 3．4TNF-o的含量的测定 操作按说明书进行。 1．1 lI 4．2．1建立标准曲线：设标准孔8孔，每孔各加入标准品稀释液100L，第一孔加100 1．L 1．t L，混匀后稀释100L到第二孔，如此对比稀释到第六孔，最后从第六孔稀释100L弃 去，第七孔为空白对照，第八孔为0孔。 1．1L。 4．2．2样品孔每孔加入待测样品100 4．2．3粘上封纸板，放37℃温浴90分钟。 4．2．4用洗涤液洗涤检测板5次，每次均在厚迭吸水纸上拍干。 4．2．5每孔(除0孔外)加入第一抗体工作液50uL，置37℃温浴60分钟。 4．2．6洗板同前 L，置37℃温浴30分钟。 4．2．7每孔(除0孔外)加入酶联工作液100lI 4．2．8洗板同前 4．2．9每孔加入TBM显色剂A、B各一滴，放37℃避光显色15分钟。 4．2．10每孔加入终止液一滴，轻轻混合。 4．2．11用450am波长读吸收值。 4．2．12使用计算机软件绘制标准图线。 3．5统计学分析方法 使用SPSSl2．0软件进行统计学分析，所有数据以x±s表示，多组间均数比较使用成组 设计的方差分析，各组间的两两比较使用S—N-K法，检验水准取0．05。 4 山西医科大学磺士学位论文 结果 一、大鼠肺间质纤维化模型的改变(图1) 1．一般状况观察 正常对照组大鼠活泼好动，呼吸平稳，毛发光泽，体重逐渐增加；模型组大鼠精神萎 靡，行动迟缓，拱背蜷卧，饮水进食量减少，撮毛、消瘦，有呼吸频率加快，呼吸动度加大等 明显呼吸困难征象。 2．大体标本 正常大鼠双肺呈粉红色，表面光滑；7天时模型组双肺颜色灰暗，光泽差，可见散在 的灶状出血点；28天模型组大鼠双肺体积缩小，硬度增加，可见小片状凹凸不平的苍白灶， 表面结节样改变。 3．显微镜下观察 A组肺泡结构正常，肺组织结构清晰，无炎性细胞浸润。B组7天时见有肺泡间隔增厚， 肺泡腔内见明显的炎性细胞渗出，主要为肺泡巨噬细胞和中性粒细胞，间有淋巴细胞浸润； 28天时，可见肺泡结构消失，代之以增生的纤维组织，其间可见炎性细胞渗出c组7天时见 有肺泡间隔增厚，但程度较轻，呈局限性，肺泡腔内见少量炎性细胞渗出。28天时肺纤维 化程度较B组减轻，部分呈局灶性，肺泡间隔增厚，肺泡腔内见少量炎性细胞渗出。 二、三组肺匀浆羟脯氨酸含量变化(见袭1) 肺匀浆羟脯氨酸含量与C组肺匀浆羟脯氨酸含量相比差别有显著性(尺O．05)。 三、大鼠气道反应性测定 (尺0．05)。(见表2图2，5) 四、大鼠血清TGF．B1蛋白的表达(表3，图3) 中的含量相比有差别(尺O．05)。 五、大鼠血清TNF-Q的含量的测定(表4，图4) 5 山西医科大学磺士学位论文 血清中的含量相比有差别(尺0．05)。