反相超效液相色谱―质谱联用分离分析食用油中甘油三酯.docVIP

反相超效液相色谱―质谱联用分离分析食用油中甘油三酯 　　摘 要 采用反相超效液相色谱-质谱联用的方法分离分析食用油中的甘油三酯。使用总长40 cm的串联超效C18色谱柱（10 cm+ 15 cm+ 15 cm），以乙腈-异丙醇（50∶50， V/V）为流动相，流速0.2 mL/min， 柱温25℃，在大约74 MPa的高柱压下分离，APCI离子化-质谱检测。食用油以异丙醇溶解后直接进样。实现了对食用油中甘油三酯组分的更精细区分，获得了玉米油、大豆油、花生油、葵花籽油、稻米油、橄榄油和芝麻油等市售食用油中甘油三酯组成的谱图。结果显示，甘油三酯在相同食用油中的组成相似，而在不同食用油中的组成存在差异。采用本方法，通过差异的色谱峰可直接识别出大豆油中掺入的5%猪油。本方法为识别掺假食用油提供了有价值的途径。 　　关键词 反相超效液相色谱-质谱联用； 甘油三酯； 食用油 　　1 引 言 　　三脂肪酸甘油酯（甘油三酯）由1个甘油分子与3个脂肪酸分子结合成酯而成，是食用油的主要成分。根据碳链的长度以及不饱和度，脂肪酸的种类可高达800余种。动物及植物油脂主要集中在含有0～3个双键的C8～C26的直链脂肪酸，同时由于结合位置的不固定，导致了甘油三酯的种类相较脂肪酸更趋向于复杂多样[1]。但常见动物油和植物油中主要存在的仅是含有C16和C18的甘油三酯，如脂肪酸为棕榈酸（C16∶0，P）、硬脂酸（C18∶0，S）、油酸（C18∶1，O）、亚油酸（C18∶2，L）、亚麻酸（C18∶3，Ln）的甘油三酯。其它脂肪酸的甘油三酯含量普遍较低。 　　目前，在世界范围内广泛存在着食用油掺杂的问题，在中国尤以地沟油掺杂问题备受关注[2～4]，甘油三酯作为食用油的主要成分，对其进行分离分析是一个值得关注的研究方向。高效液相色谱-质谱联用技术（LC-MS）在分离分析甘油三酯方面具有独特的优势，不同的液相色谱柱可以对甘油三酯形成不同程度的分离，高灵敏质谱检测器为分离后的定性识别与定量分析提供了重要条件。目前，用于分析甘油三酯的质谱离子源有ESI与APCI两种离子源。ESI源适用于检测中等极性以及强极性的化合物，在使用ESI源时可利用多级质谱通过将甘油三酯分子打碎后得到的子离子峰，获得对甘油三酯更好的定性分析结果[5，6]。通常使用ESI源时需要在流动相中加入盐类才会有好的离子化效果[7～9]。APCI源适用于弱极性化合物的检测，甘油三酯在APCI源中主要形成3种类型的碎片离子： 酰基离子（RCO）+、单酰基甘油离子（M+H-RCOOH-RCO）+和二酰基甘油离子（M+H-RCOOH）+，根据这些碎片离子峰的特征，可以确定甘油三酯的结构[10～13]。 　　本实验使用串联长柱建立了超高效液相色谱-质谱联用（UPLC-MS）分析食用油中甘油三酯组成的方法。与普通的HPLC分离相比，本方法可以简便地对食用油中的甘油三酯实现更精细的分离分析，从而可根据不同食用油之间甘油三酯的精细差异，区分常见食用油，并可检测掺入少量猪油的大豆油。2 实验部分 　　2.1 仪器与试剂 　　LCMS 2020型超高效液相色谱仪（日本 岛津公司）， 包括脱气机、两个LC-30AD泵、 CTO-30A 柱温箱、SIL-30AC自动进样器、SPD-M20A二极管阵列检测器及使用APCI源的质谱检测器。数据分析软件采用LabSolution software （version 5.53）。 　　三油酸甘油三酯、乙腈（HPLC级）、异丙醇（HPLC级）均购自国药集团化学试剂有限公司。食用油样品除猪油为自制外，其它均购自本地超市。 　　2.2 实验方法 　　2.2.1 样品及其准备 　　（1）液体样品 移取10 μL样品溶于1000 μL异丙醇中，浓度为1%（V/V），直接进样。（2）固体样品 称取0.5 g溶解于50 mL正己烷中，浓度为1%（w/V），直接进样。 　　2.2.2 色谱与质谱条件 　　液相色谱条件：Thermo Syncronis C18色谱柱（100 mm×2.1 mm， 1.7 μm）与两根月旭Ultimate UHPLC XB-C18（150 mm×2.1 mm， 1.8 μm）色谱柱串联。流速为0.2 mL/min，流动相为乙腈-异丙醇（50∶50， V/V）等度洗脱。进样量为1 μL。 　　质谱条件： APCI电离源， 正离子电离模式， 质荷比（m/z）范围300～1050， 雾化气流速2.5 L/min， 干燥气流速5 L/min， APCI温度250℃， DL温度250℃， Heat 温度200℃， 检测器电压1.05 kV。 　　3 结果与讨论 　　3.1 实验条件优化 　　使用单根C18超效柱（Thermo Syncronis