反相高效液相色谱法测定人血浆中兰索拉唑浓度相关研究.docVIP

反相高效液相色谱法测定人血浆中兰索拉唑浓度相关研究 　　摘要：目的 探讨分析反相高效液相色谱法测定人血浆中兰索拉唑的血药浓度。方法 将受试者的血浆随机分成两组，实验组用兰索拉唑，对照组用奥美拉唑，两组同时以泮托拉唑为内标物，以叔丁基甲醚为提取物，采用反相高效液相色谱法测定人血浆中兰索拉唑的血药浓度。结果 实验组的线性方程：Y=10.758X+0.006667，相关系数r为0.9998；对照组的线性方程：Y=6.889X-0.000587，相关系数r为0.9999。实验组的日内精密度4%，日间精密度7%；对照组的日内精密度5%，日间精密度6%。实验组的相对回收率98.15%～102.5%；对照组的相对回收率98.01%～101.15%。结论 反相高效液相色谱法测定人血浆中兰索拉唑的血药浓度，方法操作简单，结果准确，灵敏度高，与奥美拉唑比较无显著性差异，可以用于药代动力学研究。 　　关键词：反相高效液相色谱法；兰索拉唑；血药浓度；药代动力学；奥美拉唑 　　反相高效液相色谱法（reversed phase high performance liquid chromatography， RP-HPLC）是一种由非极性固定相和极性流动相所组成的液相色谱体系。兰索拉唑是继奥美拉唑药物后的又一种质子泵抑制剂[1]，临床多将其应用于对胃溃疡疾病、十二指肠溃疡疾病、以及反流性食管炎疾病的治疗过程当中，患者通过服用兰索拉唑药物的方式，能够自血液进入壁细胞内后部，并且可以支持在碱性环境条件下，实现与质子泵当中（H+/K+）-ATP酶的疏基集合[2]。目前，绝大部分测定人血浆当中兰索拉唑血药浓度的方式多为反向液相色谱法，但在操作简便性与可靠性方面并不理想。为此，本文提出了一种更加快速与简便的反向高效液相色谱法，并将其应用于对人血浆兰索拉唑浓度的测定工作中，取得了较为满意的效果，现总结并报告如下： 　　1仪器与试剂 　　1.1仪器 HPLC（高效液相色谱仪）厂家：Waters，检测器Waters 2487；高速低温离心机厂家：BECKMAN；超声清洗器（KQ3200）；涡旋混合器厂家：上海琪特； 电子分析天平（BS124S）厂家：sartorius。 　　1.2试剂 对照品兰索拉唑，上海沪宇生物科技有限公司，100709；对照品奥美拉唑，上海沪宇生物科技有限公司，100367；对照品泮托拉唑，上海信然生物科技有限公司，100575；乙腈，上海星可生化科技有限公司，色谱纯；其余试剂，分析纯；水，蒸馏水。 　　1.2方法 将受试者的血浆随机分成两组，实验组用兰索拉唑，对照组用奥美拉唑，两组同时以泮托拉唑为内标物，以叔丁基甲醚为提取物，采用反相高效液相色谱法测定人血浆中兰索拉唑的血药浓度。 　　1.2.1色谱条件 色谱柱为安捷伦 Eclipse XDB-Cl8（150 mm×4.6 mm×5 m）；保护柱为安捷伦Eclipse XDB-Cl8（12.5mm×4.6 mm×5 m）；以0.01mol/L磷酸二氢铵（含千分之一正辛胺）：乙腈=66：34为流动相；检测波长为采用流速1.0ml/min-1；检验波长兰索拉唑6 min～15 min是285nm，奥美拉唑0 min～6 min是305nm；温柱设定为40℃，进样量为50μl[3]。 　　1.2.2溶液配制 分别精密称取10mg兰索拉唑对照品和奥美拉唑的对照品，放在10ml的量瓶中，使用甲醇进行溶解稀释至其刻度，在摇晃均匀后得到10mg·ml-1的对照品储备液。精密称取10mg泮托拉唑放在10ml的量瓶中，使用甲醇进行溶解稀释至其刻度，在摇晃均匀后得到10mg·ml-1的内标储备液。 　　1.2.3线性关系的试验 精密吸取400μl空白血浆，放入吡美拉唑，使浓度为50，500，4000μg·L-1溶液，进样后测定色谱峰面积，峰面积定量分析样品浓度[3]。 　　1.2.4回收率的试验 对采集的血浆样品的峰面积与标准溶液测得的峰面积进行比较，计算提取回收率[4]。 　　1.2.5精密度的试验 放入兰索拉唑和奥美拉唑的50μg·L-1、500μg·L-1、4000μg·L-1浓度不同的样品中，5次/d进行浓度检测，连续进行5d检测。对平均日间精密度进行计算。 　　1.2.6稳定性的试验 把血样放置在冰箱中，分别冻存0h、5h、10h、30d、60d、90d后取出，对稳定性进行观察。 　　1.3统计学方法 采用t 检验和χ2 检验，P0.05 为差异有统计学意义。 　　2结果 　　2.1线性关系 实验组的线性方程：Y=10.758X+0.006667，相关系数r为0.9998；对照组的线性方程：Y=6.889X-0.000587，相关系数r为0.9999。表明兰索拉唑和奥美拉唑在