十一方酒对兔膝骨性关节炎TGFβ1以及病理形态学影响.docVIP

十一方酒对兔膝骨性关节炎TGFβ1以及病理形态学影响 　　[摘要]目的：通过检测兔膝骨性关节炎滑膜、关节软骨中TGF-β1的含量以及观察关节滑膜、软骨的形态学改变，探讨十一方酒治疗膝骨性关节炎的疗效与作用机制。方法：将60只新西兰大白兔随机分为5组，每组12只，分为空白组、模型组和对照组，十一方酒高剂量组以及十一方酒低剂量组，通过兔膝关节腔内注射木瓜蛋白酶建立膝骨性关节炎模型。十一方酒高、低剂量组给予十一方酒涂膝关节。对照组给予扶他林。8周后处死动物，采集滑膜、关节软骨标本，用免疫组织化学方法检测其中TGF-β1的含量，同时观察滑膜及关节软骨电镜下的病理变化。结果十一方酒高、低剂量组与扶他林组均能显著提高关节滑膜与软骨中TGF-β1的含量，与模型组比较，差异具有统计学意义（P0.05）。结果：十一方酒高、低剂量组与扶他林组关节软骨表面较模型组光滑。结论： 十一方酒对兔膝骨性关节炎模型软骨退行性病变和滑膜炎症具有改善作用，其可能的机制是通过影响滑膜和软骨中TGF-β1含量而发挥作用。 　　[关键词]十一方酒；膝骨性关节炎；实验研究 　　[中图分类号]R961 [文献标识码]B[文章编号]1673-7210（2007）07（b）-134-02 　　 　　骨性关节炎是以关节软骨退变、继发性骨质增生和滑膜改变为主要特征的一种慢性关节疾病，其患病率高达总人口的8.3％，是我国四大老年病之一。本实验通过观察十一方酒对兔膝骨性关节炎模型软骨及滑膜中TGF-β1含量变化以及病理形态学改变的影响，为临床治疗提供实验依据。 　　 　　1 材料与方法 　　 　　1.1 实验动物 　　6~10个月龄健康新西兰大白兔60只，体重（250±20） g，雌雄不限，由河北省实验动物研究中心提供。实验室温度（23±2）℃，相对湿度60％，常规饲料喂养1周，自由饮水。 　　1.2 实验药品与试剂 　　木瓜蛋白酶：SIGMA公司产品，批号06－498；TGF-β1免疫组化试剂盒：解放军总医院东亚免疫技术研究生产，批号060625，由石家庄长江生物实验科技开发有限公司代购；十一方酒(含当归、姜黄、木瓜等11味药物加米酒浸渍3个月滤过、紫外线消毒研制而成)，由湛江市第一中医院药剂科提供；扶他林乳胶剂由北京诺华制药有限公司生产，批号：05166。 　　1.3 动物分组 　　动物常规饲养1周，随机分为5组，空白组（A），模型组(B)，对照组(C)，十一方酒高剂量组(D)，十一方酒低剂量组(E) 　　1.4 造模方法 　　按照日本头康彦等[1]的兔膝关节腔内注入木瓜蛋白酶造成膝骨性关节炎病变模型方法。正常饲养1周后，将B，C，D，E组用巴比妥钠( 30 mg/kg，静脉汁射)麻醉，麻醉生效后,双后腿膝关节周围剃毛，常规消毒皮肤，弯曲膝关节。经关节正中或两侧进针，将1.6%木瓜蛋白酶生理盐水溶液0.5 ml通过髌上韧带注入兔膝关节腔，分别于实验的第1、4 、7日注入兔膝关腔中。 　　1.5 给药方法 　　第一次注射木瓜蛋白酶后，A、B组给予50％酒精涂膝关节处，每日3次，每次2 ml；C组予以扶他林涂膝关节处，每日3次，每次2 ml；D组予以十一方酒浓缩1倍涂膝关节处，每日3次，每次2 ml；E组予以十一方酒涂膝关节处，3次/d，每次2 ml。用药8周。 　　1.6 取材及指标观察 　　8周后处死动物，立即解剖膝关节腔。以锐利刀片切取膝关节正中的部分滑膜以及软骨组织，10％福尔马林溶液固定，再移入脱钙液脱钙，石蜡包埋，采用常规免疫组织化学染色，免疫组化法检测滑膜及软骨中TGF-β1含量。切膝关节软骨、滑膜2 mm厚全层软骨标木，3%戊二醛酸溶液中固定24 h，0.1 mol/L磷酸缓冲液冲洗3次，加0.1%四氧化锇固定90 min，0.1 mol/L磷酸缓冲液冲洗3次，乙醇梯度脱水，醋酸异戊酯保存过夜，二氧化碳临界点干燥，定向黏附于载物台上，真空喷金后，扫描电镜下观察、摄片。 　　1.7 统计学处理 　　所有数据均采用SPSS13.0 for windows统计软件进行处理。各组测定值均以均数（x）±标准差（s）表示，统计方法采用单因素方差分析，两两比较运用 q检验，均以P0.05为显著性检验界线。 　　 　　2 结果 　　 　　2.1 一般状况 　　造模前后，各组动物毛色洁白，光泽柔顺，体态健壮，饮食大便正常，各组动物均未出现死亡。 　　2.2 滑膜及关节软骨组织中TGF-β1细胞分数（表1） 　　 　　2.3 电镜结果 　　A组软骨表面光滑，似覆盖一层无定形物质。其下胶原纤维结合成束，具有典型的拱形结构。B组软骨表面凹凸不平，出现宽、深不一的裂隙，裂隙中可见胶原纤维裸露，增粗、排列杂乱、甚至断裂。C、D、E组