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单纯高血糖诱发大鼠动脉粥样硬化实验研究 　　摘要：目的 以糖尿病大鼠为实验对象，研究单纯高血糖是否可诱发动脉粥样硬化，以及血脂和同型半胱氨酸在糖尿病大血管动脉粥样硬化中的作用。方法 用高脂饲料+链脲佐菌素STZ腹腔注射诱导2型糖尿病模型，研究分为正常对照组（C组）、1个月模型组（DM1组）、3个月模型组（DM3组）、5个月模型组（DM5组），均定期测定血糖、体重、血脂等。用形态学方法观察糖尿病大鼠动脉粥样硬化的表现，抽血化验血脂，同型半胱氨酸和血糖水平。结果 实验正常对照组颈动脉HE染色镜下可见血管光滑平整；第一月时镜下可见血管平滑肌稍紊乱；第3个月时光镜下可见动脉血管壁局限增厚，细胞核增多，可观察到泡沫细胞，第5个月时已形成脂纹；糖尿病各组与对照组比较血糖、三酰甘油、总胆固醇、低密度脂蛋白、同型半胱氨酸和果糖胺水平较对照组显著升高（P0.01）。结论 单纯高血糖动物模型出现了明确的动脉粥样硬化部分特征性表现，说明高血糖是动脉粥样硬化的一重要原因；三酰甘油、高胆固醇、高低密度脂蛋白、高同型半胱氨酸及果糖胺的升高可能是糖尿病动脉粥样硬化的危险因素，其作用可能与内皮细胞受损，动脉壁局部炎症介质表达有关。 　　关键词：动脉粥样硬化；高血糖；血脂；同型半胱氨酸；糖尿病 　　中图分类号：R541 R285 文献标识码：A 　　糖尿病（DM）患者大血管病变是其死亡的主要原因，其心、脑血管疾病的发病率均显著高于非糖尿病人群[1，2]。但单纯高血糖与动脉粥样硬化的关系及其可能机制仍不十分清楚。本研究以单纯高血糖为特征的2型糖尿病模型大鼠为研究对象，观察高血糖是否能引起颈动脉脂纹、脂质斑块形成，以及其与血糖、血脂、同型半胱氨酸及果糖胺之关系，探讨糖尿病动脉粥样硬化的形成和发展机制。 　　1 材料与方法 　　1.1 材料 12周龄SPF级SD雄性大鼠（260 g ～ 280 g）50只（购自湖南斯莱克景达实验动物中心）， 40%脂肪的胰岛素抵抗诱导模型食料（上海斯莱克实验动物有限责任公司），大鼠胰岛素（INS）酶联免疫试剂盒（美国Millipore 公司），全自动生化仪（日本HITACHI 7600120）。 　　1.2 方法 　　1.2.1 动物模型制备及分组 SD雄性大鼠适应性喂养1周后按体重随机分为正常对照组（对照组12只）和糖尿病模型组（38只），均高脂饲料喂养，每只大鼠每天定量25 g，自由饮水，自然昼夜照明，相对湿度为50% ～ 70%，室温（22 ～ 24）℃。4周后，隔夜空腹12 h，造模组大鼠腹腔注射链脲佐菌素（Streptozocin，STZ ）溶液35 mg/kg；对照组腹腔注射0.1 mol/L柠檬酸钠缓冲液。72 h后禁食8 h ～ 12 h大鼠尾静脉采血测定空腹血糖（FBG），以血糖浓度16.7 mmol/L以上为2型糖尿病大鼠模型造模成功，达到模型标准且未死亡的共30只。30只糖尿病模型大鼠随机分为糖尿病1月组（DM1组），3月组（DM3组）和5月组（DM5组），每组10只大鼠。但实验终点由于糖尿病模型大鼠出现死亡，因此DM1组最后为9只，DM3组为10只，DM5组为8只。 　　1.2.2 大鼠体重 采用电子盘称每1周称体重1次。 　　1.2.3 大鼠血液样本采集 0月，1月，3月，5月空腹大鼠乙醚麻醉后内眦静脉取血，室温放置30 min 后3 000 r/min离心 15 min分离血清，-80℃保存。 　　1.2.4 空腹血糖测定 采用已糖激酶法通过全自动生化仪测定外周血空腹血糖（fasting blood glucose，FBG）。 　　1.2.5 胰岛素测定 采用ELISA方法测定大鼠空腹血清胰岛素，实验步骤严格按照试剂盒说明书实验程序进行，胰岛素含量根据试剂盒标准曲线测得。 　　1.2.6 血清生化指标测定 三酰甘油（TG）、总胆固醇（TC）、高密度脂蛋白胆固醇（ HDLC）、低密度脂蛋白胆固醇（LDLC）、同型半胱氨酸 （HCY） 和果糖胺（FMN）含量采用全自动生化仪测定。 　　1.2.7 形态学观察 分别于采血后经水合氯醛腹腔麻醉大鼠，开胸、开腹，夹闭腹主动脉，将连有输液器的针头插入左心室并剪开右心耳，先灌注150 mL 生理盐水，随后用4.0%多聚甲醛进行灌注。待灌注完成后取出左侧颈总动脉，将所得血管放入装有4.0%多聚甲醛的容器中固定4 h ～ 6 h ，包埋，石蜡切片厚4 μm ，切片脱蜡水化，常规HE染色，光镜观察动脉粥样硬化病变。 　　1.2.8 统计学处理 采用SPSS 20.0软件处理，计量资料以均数±标准差（x±s）表示，多组间比较采用单因素方差分析，方差齐时采用LSD比较，方差不齐时用秩和检验。相关性分析统计采用Person法。 　　2 结 果