参七汤治疗阿尔茨海默病大鼠行为学和抗氧化作用实验研究.docVIP

参七汤治疗阿尔茨海默病大鼠行为学和抗氧化作用实验研究 　　摘要：目的：观察“参七汤”对阿尔茨海默病（AD）大鼠模型行为学和抗氧化能力的影响（治疗作用）。方法：用水迷宫筛选正常大鼠50只，随机分为A组（空白组），B组（假手术组）、C组（模型组）、D组（脑复康组）、E组（参七汤组）、每组各10只。A组不做处理，B组海马内及腹腔注射生理盐水，C组、D组、E组利用腹腔注射D-Gal联合海马内注射 Aβ1-42制造AD模型，连续42天。D组以临床治疗AD的有效药脑复康作为西药对照灌胃治疗。E组参七汤 0.25g?kg-1?d-1灌胃治疗，连续21天。42天后，水迷宫测试，禁食，全麻下行腹主动脉采血，用ELISA测定大鼠血清超氧化物歧化酶（SOD）和丙二醛（MDA）含量。结果：与模型组相比，行为学方面治疗组（D、E）明显改善，且E组优于D组（P0.05）；在降低血清MDA方面，治疗组（D、E）明显降低（P0.01），且E组优于D组（P0.05）；在提升大鼠海马内SOD含量方面，治疗组（D、E）含量明显提升（P0.01），且E组优于D组，差别有意义（P0.05）。结论：应用“参七汤”改善AD大鼠模型行为学和抗氧化能力效果比西药对照组较好。 　　关键词：阿尔茨海默病；中医药治疗；动物研究； 　　1 材料与方法 　　1.1实验动物 清洁级SD大鼠50只，雄性，体重200～250g，标准环境下饲养：温度23±0.5℃，自然光线，自由进食进水。（北京维通利华实验动物技术有限公司提供，合格证编号为SCXK（京）2012-0001）； 　　1.2 试剂 Aβ1-42：美国Sigma公司， 1mg Aβ1-42溶于200μl人工脑脊液中，配成浓度为5mmol/L的溶液，0.22μm滤器过滤除菌，密封后置于37℃细胞培养箱中，96小时候即成凝聚态， 4℃保存备用。 D-Gal：上海生工生物，进口分装，溶于生理盐水中制成25%D-Gal溶液，过滤除菌，4℃保存。 SOD、MDA检测试剂盒购自上海哈灵生物科技有限公司。 　　1.3 仪器 Morris水迷宫系统：（北京硕林苑科技有限公司研制）； 大鼠脑立体定位仪（深圳瑞德生命科技有限公司，STRONG-Ⅱ）； 电动颅钻（北京硕林苑科技有限公司，STRONG-Ⅱ）； 微量进样器（上海高欣玻璃仪器厂）； 超速离心机。 　　1.4 动物筛选、动物分组及模型制备 　　1.4.1动物筛选及实验分组 　　大鼠喂养5天使其适应环境后进行水迷宫学习训练。参照文献 [1]训练方法，实验前先将大鼠放置在平台上15秒钟，然后将大鼠面向水迷宫池壁，头朝下，沿水迷宫四个象限中点依次放入水池，令其游完60秒，然后引导大鼠至平台休息15秒，平台设在第一象限。依次游完4个象限为训练1次。每天训练一次，训练3次后，继续测试1次，超过2个象限在60秒内不能找到平台者视为智力异常，予以剔除。余下大鼠供实验用。随机分为5组：正常组、假手术组、模型组、参七汤治疗组和脑复康治疗组，每组10只。各组大鼠分别于术前、术后7d及术后28d进行Morris水迷宫测试。 　　1.4.2模型制备 　　大鼠腹腔注射10%水合氯醛麻醉后，头部备皮，使其皮肤暴露，碘伏消毒，在后囟处沿矢状线切开皮肤，暴露颅骨，固定在脑立体定位仪上，依照包新民的《大鼠脑立体定位图谱》，确定双侧海马注射点：前囟后3.0mm，左右旁开2.0，硬脑膜下3.6mm。用电动颅转打孔，用微量进样器缓慢注射Aβ1-42 2μL（Aβ1-42 5μg）5min内注射完毕，留针5min后缝合伤口。模型组注射Aβ1-42，假手术组注入等量生理盐水，单笼饲养至大鼠完全清醒。然后大鼠连续7d皮下注射青霉素（10万单位/d），防止感染；同时模型组、参七汤治疗组和脑复康治疗组大鼠连续30d腹腔注射D-Gal50mg（kgd）-1，使其衰老。 　　1.5 处理方法 D、E组从造模开始后就进行治疗，每天早晨8：00～9：00灌胃给药，参七汤治疗组和脑复康治疗组给予灌胃，其他组给予等体积的纯净水灌胃，每天1次，持续21d。 　　1.6 指标测定 　　3 讨论 　　本研究通过腹腔注射D-Gal使其急性衰老的基础上，双侧海马内注射Aβ1-42来制作AD模型，能引起大鼠学习记忆能力下降，并使神经组织中出现老年斑（SP）及神经原纤维缠结（NFT），是现在较为理想的阿尔茨海默病动物模型的复制方法。用Morris水迷宫来观察大鼠的学习记忆功能，用ELISA测定大鼠血清SOD活性和MDA含量。 　　AD在病理上可表现为SP及NFT，神经元数量减少，神经细胞中脂褐素增多。进行性认知功能减退是AD的主要临床特征，也是AD治疗学研究的主要目标。D-Gal可引起AD大鼠脑过氧化损害， D-Gal在半乳糖氧化酶的作