同时测定饲料中乙酰甲喹喹乙醇喹烯酮3种药物方法研究.docVIP

同时测定饲料中乙酰甲喹喹乙醇喹烯酮3种药物方法研究 　　摘要 建立高效液相色谱法（HPLC）同时测定饲料中乙酰甲喹、喹乙醇、喹烯酮3种药物含量的方法，饲料中3种药物经磷酸盐缓冲液（pH值3.0）-乙腈-甲醇（55∶25∶20）超声提取，采用Waters公司C18（4.6×250mm，5μm）色谱柱，流速1.0mL/min，进样量20μL，柱温24℃，检测波长260nm。该色谱条件下，3种药物分离良好，在2～100μg/mL之间，线性良好（r＞0.999 6），平均添加回收率均高于80%，RSD≤10%，检出限2mg/kg。该方法操作简便易行，准确可靠，能够满足实际样品的分析要求。 　　关键词 饲料药物测定；乙酰甲喹；喹乙醇；喹烯酮；高效液相色谱法 　　中图分类号 S816.17文献标识码A文章编号 1007-5739（2008）24-0230-01 　　 　　喹乙醇、乙酰甲喹和喹烯酮是喹?f啉类合成抑菌药物，该类药物具有抗菌效果好、促生长、价格便宜等优点，被广泛添加到饲料中用于生产养殖，但由于不正确使用，中毒事件时有发生，同时该类药物的残留对人体具有潜在致癌性和产生抗药性的可能，国际上大多数国家将其列为限用药物。我国对饲料中喹乙醇、乙酰甲喹和喹烯酮单个检测研究较多，但对于饲料中3种药物多残留检测方法研究较少。因此，建立一种准确、高效地同时测定饲料中3种药物多残留的检测方法十分必要。试验采用高效液相色谱法同时测定饲料中乙酰甲喹、喹乙醇、喹烯酮3种药物，该方法的建立将为饲料产品中其他喹?f啉类药物多残留检测提供参考。 　　1 材料与方法 　　1.1药品、试剂 　　喹乙醇、乙酰甲喹、 喹烯酮对照品（纯度98%）均购自中国兽医药品监察所；乙腈、甲醇：色谱纯，美国Fisher Chemical公司；二甲基甲酰胺、三乙胺、85%磷酸均为国产分析纯。 　　1.2 仪器与设备 　　Agilent 1100高效液相色谱仪（二极管阵列检测器）；十万分之一天平、pH酸度计（赛多利斯公司）；离心机（日立公司）；超声波仪（江苏昆山市超声仪器有限公司）；超纯水器（成都康林公司）。 　　1.3 色谱条件 　　色谱柱：Waters公司C18（4.6×250mm，5μm）；流动相：磷酸盐缓冲液（5mL 85%磷酸稀释到1 000mL，用三乙胺调pH值3.0）-乙腈-甲醇（55∶25∶20）；流速1.0mL/min，进样量20μL，检测波长260nm。 　　1.4 样品的处理 　　精密称取5.0g饲料试样，置于具塞锥形瓶中，精密加入50mL流动相，超声波提取3min（避光操作），将试样提取液倒入离心管中，3 000rpm离心15min。取上清液用0.45μm滤膜过滤，滤液作为试样溶液，待用。 　　2结果与分析 　　2.1线性关系 　　精密称取喹乙醇、乙酰甲喹、喹烯酮对照品各50mg于100mL棕色容量瓶，加二甲基甲酰胺10mL，加入流动相至刻度，超声摇匀作为储备液。用流动相稀释储备液成2μg/mL、5μg/mL、10μg/mL、20μg/mL、50μg/mL、100μg/mL的标准工作液，按1.3色谱条件，分别以乙酰甲喹、喹乙醇、喹烯酮各浓度峰面积（A）与相对应浓度（C）得到标准曲线的线性方程、相关系数结果见表1，3种对照品混合液色谱图见图1。 　　 　　2.2回收率的测定 　　准确称取5.0g空白饲料样品，添加标准工作液，制成含3种药物均为2mg/kg、5mg/kg、10mg/kg、20mg/kg、50mg/kg、100mg/kg的阳性添加试样，按1.4提取后检测，平均回收率分别是86.0%、84.8%、84.9%，相对标准偏差分别为6.3%、9.5%、9.2%，该检测方法可靠，回收良好。 　　2.3 精密度试验 　　为确定上述分析条件下定量分析的精密度研究了3种药物的保留时间和峰面积的重现性，6次重复进样，保留时间的RSD均小于1%，峰面积的RSD小于2%，符合精密度的要求。 　　2.4 检测限与定量限 　　应用本试验建立的检测方法，以出现药物峰（S/N＝3）（下转第232页） 　　（上接第230页） 　　的最低药物浓度作为该药物在饲料中的检出限。测得乙酰甲喹、喹乙醇、喹烯酮在饲料中检出限均为2mg/kg，结果见图2。 　　 　　2.5样品的测定 　　按1.3色谱条件，将待测样品上机测定，记录色谱图，按标准曲线法计算。 　　3 讨论 　　3.1检测环境的影响 　　乙酰甲喹、喹乙醇、喹烯酮受环境温度、湿度影响不大，但对光敏感，强光易使样品分解，使有杂质峰出现。因此，样品处理需在光线弱处操作。 　　3.2 样品的处理方法 　　有报告[1]称以三氯甲烷-甲醇溶液作为提取液，用恒温振荡方法提取后用