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响应曲面法优化金丝桃素提取工艺研究 　　摘要：优化从贯叶连翘粗提取物中提取金丝桃素的工艺条件。在单因素试验基础上，采用响应曲面法，以金丝桃素的提取率为响应值，通过回归分析各工艺参数与响应值之间的关系，预测最佳提取工艺条件。结果表明：金丝桃素最佳提取条件为：浸提温度80 ℃，浸提时间 105 min，液料比 75 mL ∶1 g，甲醇体积分数85%，比条件下提取率为 372%。验证试验证明此法合理高效，预测准确，方便可行。 　　关键词：响应曲面法；金丝桃素；提取；工艺条件优化 　　中图分类号： R284.2 文献标志码： A 文章编号：1002-1302（2014）04-0221-03 　　收稿日期：2013-08-27 　　基金项目：长白山动植物资源利用与保护吉林省高校重点实验室2012年一般基金（编号：吉农院合字[2012]第706号）。 　　作者简介：薛晓丽（1970―），女，吉林永吉人，硕士，高级实验师，主要从事天然产物化学的教学与科研工作。E-mail：lilyxue4222@。金丝桃素属骈苯二蒽酮类物质，分子式C30H16O8，广泛分布于贯叶金丝桃（Hypericum perforatum）、乌腺金丝桃（H. attenuatum）、长柱金丝桃（H. ascyron）等植物中。近年来，金丝桃素在抗肿瘤的光化学治疗、抗病毒（包括HIV）、抗抑郁机制研究等方面十分活跃。已有研究表明，金丝桃素作为有效的光敏剂，通过光动力学治疗可以有效地诱导肿瘤细胞凋亡，临床上已用于治疗基体细胞癌、胰腺癌、膀胱癌甚至脑瘤等[1-4]。另外，近年来大量试验已证明，金丝桃素为广谱抗病毒的中草药活性单体，对多种畜禽传染病有良好防治效果。已有不少文献报道了用金丝桃素防治猪高热病、鸡新城疫、鸭病毒性肝炎等[5-9]的事例，使其成为继红豆杉、人参和银杏叶之后，国内外研究的又一个热点，在新药开发上具有重大意义[10]。金丝桃素具有特殊理化性质及其在光和热的作用下易分解、易氧化变质的特性，故其提取率和产品纯度都较低，制约了其深入研究和制药工艺的发展。本试验以甲醇为溶剂，采用易于工业化生产的热浸提取方法，以金丝桃素提取率为考察指标，以提取时间、液固比、提取温度、甲醇体积分数为提取工艺的主要影响因素，通过单因素试验确定影响较大的3个因素，采用响应曲面法（response surface methodology）进行优化，确定从贯叶连翘粗提物中提取金丝桃素的最佳工艺。响应曲面法是目前广泛应用于天然产物中有效化学成分提取工艺优化的一种数据处理方法[11-13]，具有简便、试验精度高的优点，使用该方法优化后的的金丝桃素提取率有明显的提高，为金丝桃素提取的工业化生产提供一定的理论依据。 　　1材料与方法 　　1.1材料与试剂 　　供试材料为贯叶连翘粗粉，购于西安康培基生物科技有限公司。材料阴干至恒重，备用。金丝桃素对照品，购于上海融禾医药科技有限公司，纯度98%。 　　试剂包括甲醇、石油醚，均购于天津永大化学试剂有限公司，去离子水由实验室自制。 　　1.2仪器 　　紫外分光光度计（岛津 UV-2450）；恒温水浴锅（金坛医疗仪器厂HH-S4）；分析天平（梅特勒 AL204）；超纯水机（密理博-Q3）等。 　　1.3方法 　　1.3.1金丝桃素提取将贯叶连翘粗粉阴干样品过20目筛，用石油醚在55 ℃脱脂3 次，干燥备用。精确称取一定量样品，加入到一定量、一定体积分数的甲醇溶液中，置于一定温度的水浴锅中，浸提一定时间后，离心，定容。将提取液稀释10倍后，置紫外分光光度计中590 nm下检测吸光度。每个试验3次平行，取平均值，结果以提取率（E）表示。E=[（C×V）/m]×f×100%，式中：C为金丝桃素的质量浓度（μg/mL）；V为加入溶剂的体积（mL）；m为样品的质量（g）；f为稀释倍数。 　　1.3.2标准曲线绘制精确称取金丝桃素对照品5.1 mg，加入到甲醇定容至25 mL的容量瓶中，摇匀，配成质量浓度为0.204 mg/mL的对照品溶液，将此溶液稀释10倍后做为标准母液。准确量取适量标准母液，定容至10 mL容量瓶中，配成浓度为1.280～20.40 μg/mL的标准溶液。置紫外分光光度计中590 nm下检测吸光度，绘制标准曲线，得回归曲线y=0.599 2x+0.248 7，r2=0.999 9。 　　2结果与分析 　　2.1单因素试验 　　2.1.1液固比对金丝桃素提取率的影响在温度80 ℃、甲醇体积分数85%、提取时间110 min的条件下，考察液固比25 ∶1～125 ∶1（mL/g）对提取率的影响，结果如图1所示。 　　2.1.2提取温度对金丝桃素提取率影响在液固比 75 mL ∶1 g、甲醇体积分数85%、提取时