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嗜水气单胞菌LAMP快速检测方法研究

嗜水气单胞菌LAMP快速检测方法研究   摘要:利用环介导等温扩增技术(LAMP)建立了一种对嗜水气单胞菌(Aeromonas hydrophila)进行快速检测的方法。基于嗜水气单胞菌tbpA基因,设计了一套引物,并优化了反应体系的温度、时间和Mg2+浓度,分析了该方法的特异性与灵敏度。结果表明,在59 ℃条件下,LAMP的最适扩增时间为40 min,能有效检测到1 pg/?滋L核酸浓度,且检测出嗜水气单胞菌为阳性,其他菌株为阴性,该方法耗时短,灵敏度高,特异性好,适合嗜水气单胞菌的快速检测。   关键词:嗜水气单胞菌(Aeromonas hydrophila);环介导等温扩增技术(LAMP);tbpA基因;快速检测   中图分类号:S917.1 文献标识码:A 文章编号:0439-8114(2015)20-5125-04   DOI:10.14088/ki.issn0439-8114.2015.20.051   Study on the Rapid Detection of Aeromonas hydrophila by   Loop-mediated Isothermal Amplification   YU Wei1a,ZHOU Ying1b,ZHOU You-xiang2,LIN Li1a,ZHOU Yang1a   (1a.College of Fisheries;1b.College of Food Science and Technology,Huazhong Agricultural University,Wuhan 430070, China;2.Institute of Agricultural Quality Standards and Testing Technology Research, Hubei Academy of Agricultural Sciences,Wuhan 430064, China)   Abstract: LAMP (Loop-mediated isothermal amplification) as a kind of rapid detection method for Aeromonas hydrophila was established. A set of primers were designed based on the sequences of the tbpA gene of A. hydrophila. Temperature, time, Mg2+ concentration of reaction system were optimized, and detected the specificity and sensitivity of this method. The results showed that under 59 ℃, the LAMP amplification optimum time for 40 min, this method could effectively detect the nucleic acid concentration with 1 pg/μL, and the LAMP of A. hydrophila reactions was positive, others were negative. In a conclusion, the LAMP detective method was short time-consuming, sensitivity and specificity; and it was suitable for rapid detection of A. hydrophila.   Key words: Aeromonas hydrophila; LAMP; tbpA gene; rapid detection   嗜水气单胞菌广泛存在于自然界中,能在水体及土壤中生长繁殖[1],是一种典型的人-畜-鱼共患病病原菌[2]。嗜水气单胞菌已被证实为腹泻病原菌[3],可引起人类急性胃肠道感染和食物中毒,出现腹痛、腹泻、发热、急性胃肠炎等[4,5],给人类的健康带来了威胁。而国外早已将嗜水气单胞菌纳入腹泻病原菌的检测范围,是食品卫生检验的对象[6]。嗜水气单胞菌可感染草鱼、鲫鱼、鲢鱼、团头鲂、黄颡鱼等多种淡水鱼,并引起水产养殖中的鳗红鳍病、鳖赤斑病、罗非鱼腐皮病[7,8]。从20世纪90年代起,全国各地爆发性鱼病案例中分离出的致病菌中,嗜水气单胞菌所占比例越来越大。2006年,全国水产养殖业因病害造成的损失约为115亿元[9],而嗜水气单胞菌是各种病原菌中危害最大的,其使

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