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地茶咳喘露对免疫功能低下小鼠影响实验研究 　　摘要：目的：研究地茶咳喘露对免疫功能低下小鼠免疫功能的影响，并探讨其免疫作用的机制。方法：观察-生理盐水、固本咳喘片、地茶咳喘露灌胃后免疫功能低下小鼠的一般形态变化，检测腹腔巨噬细胞吞噬功能、胸腺和脾脏的重量、迟发型变态反应中左右足跖厚度差值及白细胞介素2(IL－2)的诱生水平4个指标含量或数值的变化。结果：地茶咳喘露可以增强小鼠腹腔巨噬细胞吞噬功能、增加胸腺和脾脏的重量、加强迟发型变态反应及增加I-2的诱生水平。结论：地茶咳喘露能明显增强免疫功能低下小鼠的免疫能力。 　　关键词：免疫功能低下；实验研究；中医药疗法；巨噬细胞吞噬功能；迟发型变态反应；白细胞介素2；地茶咳喘露 　　中图分类号：11285.5 　　文献标识码：A　文章编号：1673-7717(2008)Ol-0112-03 　　 　　经临床研究证实地茶咳喘露具有宣肺、化痰、止咳、平喘的功效，主治新久咳喘，用于呼吸道感染、肺炎、气管一支气管炎、支气管哮喘等呼吸系统疾病，其发病与免疫有密切的关系，多数是因免疫功能低下而发病。基于以上研究，本课题拟通过建立免疫功能低下的小鼠模型，研究地茶咳喘露对免疫功能的影响，并探讨其免疫作用的机制。 　　 　　1　实验材料 　　 　　1.1　实验动物NIH小鼠72只，雌雄各半，体重20g，由湖北中医学院动物实验中心提供。 　　1.2　实验试剂烷化剂环磷酰胺(Cyclophosphummide，cy)，批号0112025，由上海华联制药有限公司生产，武汉新特药有限公司提供。磷酸缓冲液(PBS)将磷酸氢二钠(Na2~IP04)及磷酸二氢钾(KIt2P04)按4：1的比例加入200mL蒸馏水而成，pH值为7.35。上述两种药品由武汉博士德公司提供，产品号：180043、381157。IL-2放免药盒(IL－2RIA KIT)，批号020923，由北京福瑞生物工程公司提供。肝素钠(Heparim Salt)将0.1g肝素钠粉末溶于10mL蒸馏水配制而成，pH值为5.0－7.5。肝素钠粉末由武汉亚法生物技术有限公司提供，产品号：CH0088。鸡红细胞悬液，人红细胞悬液自制。 　　 　　1.3　实验用药固本咳喘片，批号：020343，江苏扬子江制药厂生产，由武汉新特药有限公司提供。固本咳喘片由《卫生部药品标准?中药成方制剂》第十一册收载，为国家基本药物。功效益气解表、健脾益肾、止咳祛痰，主治慢性支气管炎、支气管哮喘。药理研究证实固本咳喘片具有抑制支气管分泌，提高缺氧耐力及免疫增强作用。 　　地茶咳喘露(由矮地茶、淫羊藿等组成)，每瓶100mL，浓度为1.16g／mL，批号020417，由湖北民族学院医学院附属医院制剂室提供。 　　 　　1.4　实验仪器离心机：LD5-2A型，北京医用离心机厂生产。GC一1200r放射免疫计数器，中国科学技术大学科技实验总公司中佳光电仪器分公司。天平：JN―A型精密扭力天平，上海第二天平仪器厂。 　　 　　2　实验方法 　　 　　2.1　动物分组　NIH小鼠72只，雌雄各半，体重(20±2)g，随机分为6组：正常对照组、模型组、固本咳喘片组及地茶咳喘露大、中、小3个剂量组，每组12只。 　　 　　2.2　模型制作根据王立人等《黄芪、刺五加合剂对免疫功能调节的研究》一文建立小鼠免疫功能低下模型。除正常对照组外，其它5组小鼠均在正式实验前1、3、5天，腹腔注射cy 50m/kg，隔日1次，共3次。造模期间每天观察小鼠的行动、食欲、毛发、体形状态等(如出现萎靡、蜷缩、行动迟缓、皮毛蓬松脱落、外形明显消瘦)，并于造模结束后，从正常组和各造模组中分别取小鼠2只，处死剖取胸腺和脾脏，称重比较正常组和造模组。 　　 　　2.3　治疗方法造模结束后，根据组别不同进行不同的治疗和处理。正常对照组：正常条件下喂养，不做任何处理。模型组：正常条件下饮食，不给予药物治疗。固本咳喘片组：每只小鼠灌胃给固本咳喘片悬液0.2mL(根据成人与小鼠体表面积比计算小鼠每天用量为0.0128，将固本咳喘片碾碎稀释成悬液，浓度为0.06g／mL即可)。地茶咳喘露组：每只小鼠灌胃给予地茶咳喘露0.25mL(按0.25mL／20g标准)，大剂量组每1mL含生药2.32g，中剂量组每lmL含生药1.16g，小剂量组每1mL含生药0.58g。以上各组给药时间均为7天，每日1次。 　　 　　2.4　观测指标①造模及用药期间每日观察小鼠的精神状态，活动情况，毛发及饮食等情况。②腹腔巨噬细胞吞噬功能：油镜下观察小白鼠腹腔巨噬细胞吞噬力(每片观察巨噬细胞200个，吞噬力=吞噬红细胞的巨噬细胞8／200个巨噬细胞)。③迟发型变态反应中左右足跖厚度差值：测量左右足跖厚度差值，