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基于ITS序列对紫薇分子鉴定 　　摘要：对紫薇属植物细胞核核糖体DNA转录间隔区（nrDNA ITS）序列进行分析，为紫薇植物的鉴定提供分子依据。通过提取紫薇幼苗总DNA，对nrDNA ITS序列进行PCR扩增测序，应用软件BioEdit、DNAMAN进行序列分析，MEGA计算遗传距离，构建基于K2P模型的NJ系统发育树。测序得到2条nrDNA ITS序列，长度均为615 bp。序列分析结果显示，序列1与紫薇ITS序列相似性达99.03%，遗传距离为0.003，聚类分析归为一支;序列2与毛紫薇ITS序列相似性达98.55%，遗传距离0.007，聚类分析归为一支。试验结果说明，基于nrDNA ITS序列分析法，能够对紫薇属植物进行准确的分子鉴定，从而为紫薇属的种类鉴定和种间亲缘关系提供分子生物学理论依据。 　　关键词：紫薇;分子鉴定;ITS序列;相似性 　　中图分类号： S685.990.1 文献标志码： A 　　文章编号：1002-1302（2015）04-0067-02 　　收稿日期：2014-05-15 　　基金项目：四川省科技支撑计划（编号：2012FZ0049）;四川省科技富民强县专项行动计划。 　　作者简介：冯媛媛（1970―），女，江苏淮安人，博士，讲师，主要从事植物发育生理与分子生物学研究。E-mail：fyuyang_12@163.com。 　　通信作者：赖 麟，硕士，教授，主要从事植物遗传育种研究。Tel：（028E-mail：lailin127@126.com。 　　紫薇属（Lagerstroemia Linn.）植物为千屈菜科（Lythraceae）落叶或常绿的灌木或乔木，主要分布在亚洲东部、东南部、南部和澳大利亚的北部。我国目前共有紫薇属植物24种，其中4种为我国特有[1]。紫薇属植物大多数种类有大而美丽的花，花期长达3个多月，具有较高的观赏价值，在园林绿化中得到广泛的应用。紫薇属少数植物被用作传统药物，如据我国民间记载，紫薇（Lagerstroemia indica L.）有活血、止血、消风、清热、解毒的功能，具有抗流感病毒、抗真菌作用，用于治疗产后血崩、洗疥癞癣疮[2];在菲律宾，大花紫薇（Lagerstroemia speciosa Pers.）的叶被用于治疗糖尿病和肾病[3];在印度，小叶紫薇（Lagerstroemia parviflora Roxb.）被作为止咳药和收敛药使用[4]。由于部分紫薇在自然生长状态下外观差异极小，仅靠传统的鉴定方法对其进行分类存有较大争议，需要分子生物学提供更多证据支持[1]。 　　随着分子生物学在物种鉴定领域的发展，DNA条形码技术在植物鉴定方面显示出了极其重要的作用。在众多条形码中，细胞核核糖体DNA内部转录间隔区（nrDNA ITS）序列因具有高分辨率的特点，被广泛用于被子植物物种鉴定和亲缘关系分析中[5-6]。已有学者采用RAPD、AFLP等分子标记技术研究紫薇品种和种间亲缘关系[7-8];但与RAPD、AFLP、SSR和SRAP等相比，采用ITS构建系统发育树，具有省时、省工和结果更加可靠等优点[9]。本研究通过扩增待检测紫薇属植物的ITS片段，对ITS序列进行比较分析，对待检紫薇进行分类鉴定，探讨紫薇种内和种间的遗传变异以及它们之间的亲缘关系，为紫薇种质资源的鉴定及系统学研究提供依据。 　　1 材料与方法 　　1.1 材料 　　紫薇种子购自云南昆明。大肠杆菌（Escherichia coli）DH5α菌株为笔者所在实验室保存。Pfu DNA聚合酶、Taq DNA聚合酶、pBLUE-T载体、T4 DNA连接酶购自Aidlab公司，琼脂糖凝胶回收试剂盒购自Tiangen公司。 　　1.2 方法 　　紫薇种子灭菌萌发后，采用改良CTAB法[10]提取幼苗总DNA。参照He等的方法[11]，根据不同物种间同源基因的核酸序列相对保守的特点，设计紫薇属ITS的通用扩增引物：ITS-F：5′-GAAGTCGTAACAAGGTTTCCGTAGG-3′和ITS-R：5′-TCCTCCGCTTATTGATATGC-3′，由成都金杰生物技术有限公司合成。PCR扩增程序为：94 ℃预变性5 min;94 ℃变性30 s，57 ℃退火30 s，72 ℃复性45 s，共30个循环;72 ℃延伸10 min。PCR 扩增产物回收后，连接到pBLUE-T载体上，连接产物转化大肠杆菌DH5α感受态细胞，筛选后送六合华大基因科技股份有限公司测序。 　　使用BioEdit软件编辑ITS序列，DNAMAN软件比对分析序列同源性和GC含量，MEGA软件分析K2P（Kimura-2 parameter）遗传距离，用NJ（Neighbor-Jo