基于二氧化硅球腔微电极阵列过氧化氢生物传感器制备.docVIP

基于二氧化硅球腔微电极阵列过氧化氢生物传感器制备 　　摘 要 以聚苯乙烯（PS）微球阵列为模板，采用溶胶-凝胶法在氧化铟锡（ITO）电极上制备了二氧化硅（SiO??2）球腔阵列，扫描电镜显示此方法制备的SiO??2球腔阵列高度有序。电化学研究结果表明，该球腔阵列的循环伏安曲线符合微电极阵列的电化学特点。将血红蛋白（Hb）作为氧化还原模型蛋白直接吸附于球腔内，制得电流型过氧化氢（H??2O??2）生物传感器，研究了Hb在该微电极阵列上的直接电化学和电催化性质。所构建的传感器对H??2O??2的响应快速灵敏，其线性范围为2.03×10－6～1.21×10－5 mol/L和2.03×10－5～1.21×10－2 mol/L；检出限为5.73×10－7 mol/L，米氏常数为0.266 mmol/L。 　　关键词 溶胶-凝胶法； 二氧化硅球腔； 微电极阵列； 血红蛋白； 生物传感器 　　 　　1 引 言?? 　　由于电化学生物传感器具有灵敏高、选择性好、测定快速、结构简单、价廉、能耗低且易于微型化和集成化等优点，被认为是在时效、成本等高限定场合实现生物检测的首选技术之一。然而，常规电极的检出限受待测物质传质速率和电极表面双电层充放电电流的限制，对痕量物质难以给出响应,限制了其在痕量分析中的应用。工作电极微型化是降低传感器检出限的有效手段之一。随着电极尺寸的减小，物质从本体溶液到电极表面的扩散可由平面扩散变为径向扩散，改善了待测物质的传质，电极面积的减小也有效降低了电极表面双电层充放电电流，提高了测定信号的信噪比。通常单支微电极的响应信号很微弱，可通过将多支微电极并联组成的微电极阵列解决该缺点。微电极阵列不仅能有效放大响应电流，还可保留单支微电极电化学特性，从而可在常规电化学仪器上获得满意的结果。?? 　　常见的微电极阵列的制备方法有自组装法、刻蚀法和模板法等。这些方法通常需要昂贵的精密仪器或设备，制备条件繁杂苛刻，难以得到大规模的应用。本研究小组曾以聚苯乙烯（PS）微球阵列为模板制备了二维氧化锌（ZnO）球腔阵列，并证明了ZnO球腔电阻梯度的存在使球腔阵列具备了“软”微电极阵列的功能，电化学反应只在每个球腔的底部发生。本研究利用溶胶-凝胶法在氧化铟锡（ITO）电极表面制备规则有序、结构完整的二氧化硅（SiO??2）球腔阵列，该阵列的电化学行为类似于微电极阵列。将血红蛋白（Hb）直接吸附于球腔内部制备H??2O??2生物传感器。结果表明，固定在SiO??2球腔阵列内部的Hb能保持良好的电化学活性，此传感器对H??2O??2的响应快速灵敏。本方法可方便调控球腔阵列密度，有望应用于生物传感器的设计。 　　2实验部分 　　 　　2.1 仪器与试剂?? 　　 　　612D型Langmuir槽（英国NIMA公司）；KYKY2800型数字化扫描电子显微镜（中国研究院北京科学仪器研制中心）；CHI660c电化学工作站（上海辰华仪器有限公司）；2xz-2型旋片式真空泵（上海仪表集团供销公司）。将3 mg Hb（Sigma公司）溶于1 mL PBS（pH 7.0）溶液中，配成3 g/L Hb溶液。无水乙醇、丙酮、正硅酸乙酯（TEOS）、30% H??2O??2、NaOH均为分析纯（上海国药集团化学试剂有限公司）；ITO玻璃电阻小于100 Ω（苏州板硝子电子有限公司）。实验用水均为二次蒸馏水。 　　2.2 ITO电极的处理及PS微球模板的制备?? 　　用乳液聚合法制备PS微球，粒径约为1500 nm \。PS微球模板的制备方法同文献\。 　　2.3 溶胶的制备?? 　　将5 mL TEOS与60 mL乙醇混合，放入恒温磁力搅拌器中剧烈搅拌，将6 mL水和1 mL 0.05 mol/L NaOH混合溶液用滴管慢慢加入，搅拌10 min后转移至容量瓶超声1 h，放置过夜。 　　2.4 Hb/SiO??2球腔/ITO微电极阵列的制备?? 　　将修饰有PS微球单层膜的ITO电极放在制备好的SiO??2溶胶液中，在真空干燥器中抽真空9 min（抽气速率2 L/S，真空度?1.33 Pa），使微球与模板空隙中的空气排出。当体系恢复到常压时，溶胶即填充到微球的空隙中。取出后于室温干燥，再重复此过程一次。用乙酸乙酯除去PS微球，即得SiO??2球腔微电极阵列。取10 　　 L 3 g/L Hb溶液涂于SiO??2球腔微电极阵列表面，置于冰箱中4 ℃干燥保存。使用前在PBS（pH 7.0）中洗掉附着不牢固的Hb，得到用于测定H??2O??2的生物传感器，制备示意图见图1。 　　分 析 化 学第39卷 　　第9期周丽娟等: 基于二氧化硅球腔微电极阵列的过氧化氢生物传感器制备 　　 　　图1 Hb/SiO??2球腔/ITO微电极阵列