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壳聚糖对香菇菌丝生长代谢影响 　　摘要：以香菇（??Lentinula edodes??）为试验材料，探讨在液体和固体平板培养条件下不同浓度壳聚糖对菌丝生长代谢的影响，结果表明，液体培养条件下，当壳聚糖浓度为0.017和0.01 mg/mL时，对菌球浓度、菌球直径、菌丝体生物量的促进作用与对照组相比，均达到显著差异；固体平板培养条件下，当壳聚糖浓度为0.017和??0.01 mg/mL??时，菌丝萌发最快，且与对照组达到极显著差异，同时在该条件下菌丝生长速度最快。因此，可选壳聚糖浓度0.017和0.01 mg/mL作为液体和固体平板菌丝生长促进剂的最佳浓度。?? 　　关键词：壳聚糖； 香菇； 菌丝； 生长代谢 　　 　　 　　壳聚糖(chitosan，CTS)又名壳糖胺、几丁聚糖、壳多糖、甲壳胺等，是甲壳素脱乙酰基后的产物，是直链结构的多糖［1］。壳聚糖分子中具有游离的氨基，可结合酸性分子，是天然多糖中唯一的碱性多糖。壳聚糖资源丰富，无毒、无害，是天然植物生长调节剂，可一定程度上调节植物的生长发育，提高作物的抗逆性、品质和产量等［2-6］。近来已有众多生长调节剂使用于食用菌的栽培中［7-9］，并且具有明显的增产效果。?? 　　香菇(??Lentinula edodes??)肉质肥厚细嫩，味道鲜美，香气沁人，营养丰富，是食药两用真菌，具有很高的营养、保健和药用价值。中国香菇年产约134万吨，占世界香菇总产量的77%～80%，是重要的出口商品之一［10］，为了获得更好的经济效益，笔者通过探讨壳聚糖对香菇菌丝体生长的影响，以期寻找更为有效，可提高香菇产量和品质，增加经济效益的生长调节剂。?? 　　1 材料与方法 　　1.1?Σ牧? 　　1.1.1??菌株 　　 香菇(??L. edodes??) 851菌株由北京永乐绿源食用菌中心提供。?? 　　1.1.2?χ饕?试剂和仪器 　　 壳聚糖（脱乙酰度≥85%，80目）为济南海得贝海洋生物工程有限公司产品。?? 　　1.1.3?ε嘌?基 　　 液体种子培养基：3%葡萄糖，0.2%蛋白胨，0.05% MgSO????4??，0.05% KH????2??PO????4??，0.5%酵母膏，??0.001% VB????1????，pH自然。 ?? 　　固体培养基：20%马铃薯，2%黄豆粉，??0.1%?? KH????2??PO????4??，0.05% MgSO????4??，0.01% VB????1??，pH自然。?? 　　1.2?Ψ椒? 　　1.2.1??壳聚糖溶液的制备 　　 取0.5 g壳聚糖，溶于50 mL 1 mol/L的醋酸中，搅拌均匀，用1 mol/L NaOH溶液调pH值至6.0，搅拌，使沉淀完全溶解，最后定容至??100 mL??，得0.5%的壳聚糖溶液。设置7个实验组，将0.5%壳聚糖分别加到各种培养基中，使壳聚糖浓度分别为??0.5??、??0.1??、??0.05??、??0.017??、??0.01??、??0.007??、0.005 mg/mL。?? 　　1.2.2??菌种活化及扩大培养 　　 取少量菌丝接种在PDA培养基上，转接2次，25 ℃培养10 d，当菌丝长满平板，用直径??0.5 cm??打孔器在平板上打孔。?? 　　1.2.3??壳聚糖对液体培养菌丝生长代谢的影响 　　1.2.3.1 一级液体菌种制备?? 　　取菌种块接种至装有200 mL液体种子培养基的500 mL锥形瓶中，恒温24 ℃静置??1 d??，然后置于恒温振荡器中温度25 ℃，振荡速度为??200 r/min??，振荡培养7 d得一级液体菌种。?? 　　1.2.3.2 二级液体发酵培养?? 　　装150 mL于500 mL锥形瓶中，按照1.2.1设7个实验组，以不添加壳聚糖的液体种子培养基作为对照组，每组3个重复。然后接种一级摇瓶液体菌种，按照一级液体菌种占总发酵培养基的百分比为15%，定量接种到含不同浓度壳聚糖溶液的液体发酵培养基中，于24 ℃、150 r/min培养20 d。?? 　　1.2.3.3 指标测定?? 　　a 菌球浓度：将培养发酵7 d后的菌丝球液体菌种摇匀后，取l mL培养液于培养皿中，皿下衬方格计数，重复3次。?? 　　b 菌球直径：取l mL培养液放入培养皿中，随机取20个菌球在培养皿中排成一列，测总长度，然后计算单个菌球直径，重复3次。?? 　　c 菌丝体生物量：将培养液用80目筛网过滤菌球，清水洗涤数次，然后放入干燥箱105 ℃烘干2 h，冷却后称重，之后再放入干燥箱中105 ℃烘干30 min再称重，直到2次称重的重量差不超过2 mg，即为恒重［9］。?? 　　d 氨基氮含量：采用甲醛滴定法