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大孔树脂纯化杠板归总黄酮工艺研究 　　摘 要：目的：研究大孔树脂纯化杠板归总黄酮的最佳工艺参数条件。方法：用紫外分光光度法测定，以杠板归总黄酮的吸附率和解吸附率为考察指标，考察杠板归总黄酮在3种不同类型大孔吸附树脂（D101，AB-8，NKA-9）上的吸附和解吸附行为，通过动态吸附试验考察不同上样浓度、不同体积分数的乙醇、pH值对洗脱效果的影响等因素选择其工艺参数。结果：在实验条件下，最佳纯化工艺为在pH=6条件下，以AB-8型大孔树脂为吸附剂，体积分数为70%的乙醇为洗脱剂，上样浓度为21.34 mg?mL-1。结论；该方法简便易操作，纯化工艺的效果比较好。 　　关键词：杠板归；总黄酮；大孔树脂；纯化工艺 　　中图分类号：TS201.1 文献标识码：A 文章编号：1006-8937（2016）14-0165-02 　　1 概 述 　　杠板归是蓼科蓼属植物杠板归Polygonum perfoliatum L.的干燥地上部分[1]，又名贯叶蓼、蛇不过、河白草、梨头刺、蛇倒退等[2]，具有清热解毒、利水消肿、散瘀止血、止咳祛痰、抗氧化、抗炎抗菌、抗肿瘤、护肝、降血压等功效[3]。有研究报道杠板归中的主要成分是槲皮素为主的黄酮类化合物[4]，黄酮类化合物能预防和治疗老年人的高血压和脑溢血，且有治疗冠心病和心绞痛的作用[5]，药用价值高。有效分离纯化杠板归中的黄酮类物质，对开发和利用杠板归的资源有比较重大的意义。 　　本论文应用大孔树脂进行纯化工艺的研究，对杠板归中的总黄酮进行纯化，应用静态吸附-解吸附试验在3种不同类型的大孔树脂中进行筛选，优选出最佳的大孔树脂的型号―AB-8型，并采用动态吸附试验选择AB-8型大孔吸附树脂的适宜工艺条件，为其相关大生产应用提供理论的参数和依据。 　　2 材料和仪器 　　2.1 材 料 　　杠板归（浙江中医药大学第二门诊部提供，经浙江医学高等专科学校陶锋副教授鉴定为蓼科植物杠板归的干燥地上部分），AB-8，D101，NKA-9型大孔树脂，其余试剂均为分析纯。 　　2.2 仪 器 　　Sartorius BP 110S电子天平（德国）紫外分光光度计。 　　3 方法与结果 　　3.1 标准曲线 　　精密准确地称取芦丁对照品20 mg，放置在100 mL的容量瓶中，加适量60%的乙醇溶解后，振荡，定容，即获得芦丁的标准对照液（200μg/mL）。依次精密移取0、1.0、2.0、3.0、4.0、5.0 mL芦丁对照液于25 ml的容量瓶中，补充60%的乙醇达6ml，再依次精密加入5%亚硝酸钠溶液0.75 ml，摇匀后放置6 min；再精密加入10%硝酸铝溶液0.75 ml，摇匀后放置6 min；精密加入10 mL4%氢氧化钠溶液10 ml，以60%的乙醇定容，摇匀；静置15 min后，以第1瓶为空白调零，测定各瓶溶液的吸光度的值。并以芦丁的浓度C为x，测得吸光度A为y，得到以下回归方程： 　　A=7.5958C+0.0280，r2=0.9997 　　表明芦丁在8.2 ～57.4 μg/mL的范围内其线性关系较良好。 　　3.2 大孔树脂筛选 　　3.2.1 大孔树脂的预处理 　　取3种类型的树脂适量，用95%的乙醇将其浸润24 h，使其充分溶解膨胀，倒出乙醇和杂物后湿法装柱，用95%的乙醇反复冲洗，不定时的检查其流出的液体，至其与水混合后不出现白色浑浊为止。接着用大量的蒸馏水反复冲洗，直到没有醇味，待用。 　　3.2.2 粗提液的制备 　　将杠板归粉碎至粗粉，并用60%的乙醇25倍量，于70 ℃萃取5 min，取滤液；相同的方法再重复操作一次，两次提取液放一起，回收乙醇，得到浓缩至42.67 mg?mL-1的杠板归粗提液。 　　3.2.3 样品的含量测定 　　用移液管精确移取样品1.0 mL，放置在10 mL的容量瓶中，用纯化水定容；精确移取对照品1.0 mL，放置在10 mL的容量瓶中，用纯化水定容，于500 nm波长下测定其吸光度，以对照品计算其黄酮的含量。 　　3.2.4 静态吸附与解吸附 　　精密称取1.00 g D101、AB-8、NKA-9三种型号的树脂在 50 mL的具塞锥形瓶中，加入10.67 mg?mL-1浓缩液10 ml置于摇床中，在30 ℃的条件下震摇24h，过滤，得滤液1，测定其黄酮浓度（C1）。 　　取出饱和的树脂，在树脂中加入50%乙醇10 mL，相同情况下震摇24 h，再过滤，得滤液2，测定其总黄酮的浓度（C2）。 　　吸附率=（C0-C1）×100%/C0（1） 　　吸附量=（C0-C1）×V/C0 （2） 　　解吸率=C2×100%/（C0-C1） （3） 　　式中：C0为原液的浓度（mg?mL-1）； 　　C1