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大鲵皮肤黏液中抑菌成分提取与分析 　　摘要 分别使用电刺激法和直接刮擦法刺激大鲵，收集其所分泌的黏液。利用海洋曲霉菌酸性蛋白酶酶解大鲵体表黏液获得了大鲵低聚糖肽，研究大鲵低聚糖肽的酶解法条件、生物学特性、理化活性。 结果表明，大鲵皮肤黏液中存在抑菌成分，即低聚糖肽。 　　关键词 大鲵；皮肤黏液；抑菌成分；提取；低聚糖肽 　　中图分类号 TS254.1 文献标识码 A 文章编号 1007-5739（2017）16-0226-01 　　Abstract Andrias davidianus were stimulated by electrical stimulation and direct scratches to collect the mucus. The enzymatic conditions，biological characterisics，physical and chemical activity of oligosaccharides from Andrias davidianus boby mucus were studied by enzymolysis of marine aspergillus acidic protease.The results showed that there was antibacterial component in the skin mucus of Andrias davidianus，that was oligosaccharide peptide. 　　Key words Andrias davidianus；skin mucus；antibacterial component；extraction；oligosaccharide peptide 　　中国大鲵（Andrias davidianus），属于两栖纲有尾目隐鳃鲵科，是我国二级保护动物[1]。其肌肉、皮肤、器官、骨骼等都可以入药[2]，经常食用大鲵具有延缓衰老、聪明益智、提高造血和免疫功能的功效，有助于防治恶性贫血、心脑血管系统疾病和恶性肿瘤[3]。 　　人工养殖的大鲵皮中富含胶原蛋白，其含量约占大鲵皮中蛋白质总量的63.69%，大鲵皮胶原蛋白多肽还含有7种人体必需氨基酸，并具有良好的吸水性、保水性、湿润性等，可以直接用于食品中，有丰富的营养价值和药用保健价值[4]。 　　本文将大鲵体表黏液利用海洋曲霉菌酸性蛋白酶（Aspergillus sp. Acid protease）进行酶解，获得大鲵低聚糖肽，进而研究了大鲵低聚糖肽的酶解法条件、生物学特性、理化活性[5-6]。这对大鲵体表黏液的深加工利用具有一定的理论和实际意义。 　　1 材料与方法 　　1.1 试验材料 　　大鲵；海洋曲霉菌酸性蛋白酶；清洁级昆明种小鼠，体质量18～22 g，雌、雄各1/2。 　　1.2 材料处理 　　分别使用电刺激法和直接刮擦法刺激大鲵，收集其所分泌的黏液，用无菌水清洗，冷冻，收集备用[7-9]。 　　1.3 最优酶解条件 　　通过正交试验，证实温度55 ℃、pH=2.0、E/S 0.03%、酶解时间3 h为海洋曲霉菌酸性蛋白酶酶解大鲵体表黏液的最优酶解条件。研究大鲵酶解物溶液共晶点、冻融过程以及冷冻浓缩过程，发现冷冻干燥操作前，于-15.6～-10.6 ℃对大鲵酶解物溶液进行预冻结，可使大鲵酶解物溶液浓度得到提高[5-7，10-12]。 　　1.4 飞行质谱检测 　　大鲵黏液酶解物经飞行质谱检测后被确认为大鲵低聚糖肽，且分子量低于3.5 kDa。大鲵低聚糖肽总糖含量、总蛋白含量分别为16.65%、82.61%。总糖中半乳糖醛酸、盐酸氨基葡萄糖、葡萄糖醛酸、唾液酸占大鲵低聚糖肽的比例分别为2.55%、3.29%、0.85%、0.55%[13-14]。 　　经测定，大鲵低聚糖肽中氨基酸含量丰富，符合人体营养需求，除色氨酸未测出外，还含有较高的人体其他7种必需氨基酸，其中苏氨酸（Thr）、谷氨氨酸/酰胺（Glx）、丝氨酸（Ser）的含量分?e达13.8%、12.6%、0.23%[8-11，15]，以苏氨酸（Thr）的含量最高。 　　1.5 不同剂量大鲵低聚糖肽对小鼠免疫功能的影响 　　按体质量将小鼠分成3个剂量组，分别为0 g/kg体重（对照组）、0.01 g/kg体重（低剂量组）、0.1 g/kg体重（高剂量组）[5]，用大鲵低聚糖肽饲喂小鼠8 d后，研究发现，较之饲喂大鲵低聚糖肽0 g/kg体重的小鼠，饲喂大鲵低聚糖肽0.01、0.10 g/kg体重的小鼠的血清中免疫球蛋白含量、T淋巴细胞活性、巨噬细胞数与对照组相比均显著提高。 　　选雌性小鼠随机分成空白对照组、CCL4模型对照组和联