大肠杆菌O157H7快速增菌培养基检测效果研究.docVIP

大肠杆菌O157H7快速增菌培养基检测效果研究 　　摘 要：为了验证对于大肠杆菌O157：H7菌株特异性、复苏效果以及快速生长的特点，比较了3种培养基对于大肠杆菌O157：H7的增菌效果。研究结果表明，8h培养时间内，MicroFast?快速增菌培养基对于冷损伤和热损伤的大肠杆菌O157：H7菌株具有良好的修复和增殖效果。MicroFast?快速增菌培养基营养组分适合O157菌株的生长需求，在MicroFast?快速增菌培养基中，大肠杆菌O157：H7菌株的倍增时间为13.5min，远高于mEC+n的28min，且MicroFast?快速增菌培养基能够完全抑制部分G+细菌以及部分G-细菌的干扰，对于大肠杆菌O157：H7具有特异性的选择。故MicroFast?快速增菌培养基对于大肠杆菌O157：H7菌株具有良好的选择特异性，能够短时间内（8h内）有效富集培养大肠杆菌O157：H7菌株，是一种能够实现大肠杆菌O157：H7菌株快速高效、特异增殖的培养基，将其结合检测金标卡，能够实现8h内快速检测，结果可信可靠。 　　关键词：MicroFast?快速增菌培养基 大肠杆菌O157：H7 增菌 效果 　　目前，病原微生物污染防控是食品安全的刚性需求，微生物污染是食品不合格的主要原因，也是造成食物中毒的主要原因，尤其以细菌性食物中毒为主，食品中大肠杆菌污染率最高达到了41.1%，大肠杆菌O157则为3.7%[1]。肠出血性大肠杆菌O157：H7是肠出血性大肠杆菌（EHEC）的一个血清型，是引起食源性疾病主要血清型[2]，主要临床症状为突发性腹痛、腹泻、血便，严重时并发肾衰竭，病死率高。大肠杆菌O157：H7主要污染肉类食品[3，4]，蔬菜中也时有检出[5]，是食品中潜在危害巨大的食源性致病菌。因此，快速、特性、高效的检出食品中大肠杆菌O157：H7，对于其引起的食源性疾病防控以及暴露病例的治疗具有重要的意义。本文比较了MicroFast?快速增菌培养基（简称MF培养基）、改良EC肉汤培养基（简称：mEC+n）和FP培养基对大肠杆菌O157：H7的增菌效果，以期验证不同培养基的增菌优势和特异性，为探索省时、高效、特异的快速检测方法提供依据。 　　1 材料与方法 　　1.1菌种 　　大肠埃希氏菌O157：H7（ATCC12478/NCTC12900）为实验用标准阳性菌株。 　　大肠杆菌FSCC146255/146264、ATCC25922/8739、CMCC44102/44103（Escherichia coli）、肠杆菌ATCC14028/ 43864/49027（Enterobacteria），沙门氏菌CICC21482 CMCC 50333/50220/50115/ 50335（Salmonella），李斯特氏菌ATCC 19115、CMCC54002/ 22260（Listeria），假单胞菌ATCC 27853、CMCC10104（Pseudomonas），枯草芽孢杆菌ATCC 6633、CMCC63501（Bacillus subtilis），为特异性检测用菌株。 　　1.2 培养基 　　MicroFast?快速增菌培养基，简称MF培养基，北京良润生物科技有限公司；改良EC肉汤培养基，简称为mEC+n培养基，按照GB 4789.36-2008规定步骤配置，备用；FP培养基，国外某品牌培养基。 　　1.3 仪器设备 　　紫外可见分光光度计（UV-2450），日本岛津；隔水式电热恒温培养箱（GHP-9270），金坛市城东久久实验仪器厂；净化工作台（YJ-875），吴江市华都净化设备公司；自动电热压力蒸汽灭菌器（LDZX-40C1），上海申安医疗器械厂；电子天平（BSA323S），北京赛多利斯。 　　1.4 方法 　　1.4.1 培养基的制备 　　按照说明书或者GB 4789规定的要求和步骤进行，按照需要制作液体培养基和固体培养基。 　　1.4.2 菌株修复 　　将阳性标准菌株进行制备热损伤和冷损伤。热损伤菌体制备：将标准阳性菌株的菌悬液（108～109cfu/mL）置于55℃水浴锅、加热15min后取出，室温冷却30min，定义为热损伤菌体细胞，备用。冷损伤菌体制备：将菌悬液置于-20℃冰箱、冷冻2h，然后取出室温预热30min，定义为冷损伤菌体细胞，备用；正常对照组：未做处理的菌悬液，定义为正常组菌体细胞。将相同浓度的大肠埃希氏菌O157菌悬液菌，分别按照上述规定的方法进行菌体损伤处理，36±1℃、培养8h后，稀释进行平板计数，每组做5个平行，取平均值。 　　1.4.3 生长速度 　　吸取0.2mL大肠埃希氏菌O157 NCTC12900的菌悬液（108～109cfu/mL），按照2%的接种量