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大棚土壤真菌与纤维素酶关系试验研究 　　摘要 大棚栽培环境下，通过对香石竹的根际土壤真菌和土壤纤维素酶活力状况的研究，结果表明：香石竹发病植株的根际土壤真菌数量均高于正常株，发病株根际土壤纤维素酶活力也明显高于正常植株，根际土壤中真菌数量变化趋势和纤维酶活力变化趋势相同。因此，香石竹的发病或许与两者之间的结构变化有一定关联性。 　　关键词 大棚；香石竹；真菌；纤维素酶 　　中图分类号 S154.3文献标识码A文章编号1007-5739（2008）10-0010-01 　　 　　土壤中的酶和微生物活性高低，可以代表土壤中物质代谢的旺盛程度，在一定程度上反映作物对营养元素的吸收利用与生长发育状况，是土壤肥力的一个重要指标[1]。同时土壤的生态条件决定着土壤微生物的组成、数量、分布及生化活性[2]。云南省是香石竹的生产大省，近年来香石竹是云南省出口花卉和创收外汇的主要花卉品种之一。但是，随着香石竹设施栽培规模的发展，枯萎病和立枯病是香石竹大棚大规模生产的主要障碍，严重时能造成大面积的绝收。以往对香石竹的研究多从植物生理的方面考虑，对其根际土壤微生物和酶活性的方面研究很少[3]。本文以香石竹为试验对象，对香石竹根际土壤中真菌和纤维素酶活性关系进行试验研究，希望能为掌握香石竹的发病病因和防治措施提供一些参考。 　　 　　1材料与方法 　　 　　1.1试验样品 　　土壤样品采集于昆明市呈贡县云南省英茂公司香石竹栽培基地（YM）、花农的简易大棚（HN）和晋宁安江（AJ），样品采集方法采用5点采样法[4]。采样时，分别选取相同区块的香石竹正常植株与病株，采取5~20cm土层的土壤样品装入灭菌袋中，带回实验室进行试验，不能及时处理的样品放入4℃冰箱保存备用。土样在试验前过筛、混匀、剔除杂物，以减少土壤因素造成的试验误差。 　　1.2土壤真菌的分离计数方法 　　称取10.0g土样加入盛有100.0mL无菌水的三角瓶中（预先放入直径0.3～0.5mm的玻璃珠20粒），160rpm旋转摇瓶2h，使土样均匀分散制成土壤悬浮液。吸取1.0mL土壤悬浮液于9.0mL无菌水中稀释，以此10倍稀释10-2～10-7浓度梯度系列悬浮液。 　　根据各类微生物在土壤中数量多少估计，选择适当浓度进行计数分离接种。真菌选择10-3～10-4以涂布法计数。每个稀释度平行重复3次，置适宜温度的恒温箱中培养，待菌落长起即进行结果记载[5]。 　　1.3培养基 　　真菌计数用马丁氏（Martin）培养基[6]。 　　1.4酶活性检测 　　本次试验选定纤维素酶（HCS）为检测对象，采用3，5-二硝基水杨酸比色法测定[7]。 　　 　　2结果与分析 　　 　　2.1香石竹根际土壤真菌数量变化 　　土壤微生物作为土壤有机碳周转的驱动力，土壤真菌是其中主要的成员，在纤维素、半纤维素、木质素、果胶、还原氮、溶解磷等的分解中起重要作用，直接影响到土壤有机质的数量和组成[8]。本试验共有土壤样品30个，其中YM土样16个（正常植株6份、发病植株10份）、HN土样6份（正常、发病植株各3份）、AJ土样8份（正常株3份、发病株5份），试验结果见表1。 　　 　　由表1可知，正常株根际土壤中的真菌数量均比发病株的少，表现了明显的趋势变化；而三地之间的真菌数量也有显著的数量差异，HN香石竹根际土壤中真菌数量比YM和AJ的都高。这可能是因为HN是花农的简易设施，而YM、AJ是现代化的花卉设施大棚，又有较先进的管理手段，所以使土壤的理化性质、结构、有机质含量等不同，其结果导致土壤中真菌菌落数有差异。 　　2.2设施条件下香石竹根际土壤纤维素酶活性的变化 　　纤维素酶是水解纤维素的一类酶，其主要包括内切酶，在非结晶区纤维素的任意位置使β-1，4-糖苷键断裂；外切酶，从单链纤维的还原性末端切开β-1，4-糖苷键形成具有能使DNS试剂还原变色的纤维二糖，在纤维二糖酶的作用下产生葡萄糖。在试验中以CMC-Na2为底物、DNS显色测定30个土样的综合纤维素酶活力。3个取样点纤维素平均活力由图1显示，病株下纤维素酶活力均比正常植株高。其原因可能是病株的表面及韧皮部的纤维素失去了活力，而易脱落被降解；另外由表1中土壤真菌数量可发现，发病植株中的真菌均高于正常植株。因此，也可以认为是由于霉菌的生长旺盛，导致病株根际土壤中的纤维素酶活力高于正常植株。还有可能是由于香石竹的发病，导致根际表面的纤维素流失进入土壤，相应地引起纤维素酶活力的增加。 　　 　　3结论与分析 　　 　　土壤酶活性的影响因素非常复杂，土壤中微生物种类、水气热状况、酸碱度、结构组成、养分丰缺、污染程度及培肥方式等都显著影响着土壤酶活性[9]。由表1和图1可以看出，三地间正常株和发病株的真菌数