大葱雄性不育系及保持系花药和花粉发育细胞学比较研究.docVIP

大葱雄性不育系及保持系花药和花粉发育细胞学比较研究 　　摘要: 为了从细胞学角度研究大葱雄性不育的机理, 利用石蜡切片法对大葱雄性不育系及保持系花药与花粉发育过程进行比较研究。观察结果表明: 大葱雄性不育系和保持系的小孢子母细胞都能正常进行减数分裂, 四分体可以释放出小孢子。雄性不育系的花粉败育发生于单核小孢子时期, 具有单核败育的特征。观察发现大葱雄性不育系的小孢子有2 种败育类型: ( 1) 绒毡层细胞正常发育, 但中层细胞发生了延迟解体的现象, 小孢子时期仍然存在, 与逐渐缩小的药室一起挤压小孢子细胞成一染色极深的团块状物质; ( 2) 绒毡层提前解体, 不能提供小孢子发育所需的营养, 小孢子的细胞质和细胞核逐渐解体, 仅剩下内空的花粉粒。花粉败育不仅与绒毡层有关, 还与中层细胞密切相关。 　　关键词: 大葱; 雄性不育; 小孢子发育 　　大葱(Allium fistulosum L.) 是我国栽培的重要葱蒜类蔬菜之一。目前, 利用雄性不育系是生产大葱杂交种的唯一途径。20 世纪70 年代张启沛等[1]在大葱自然群体中发现了雄性不育株, 并认为在我国大葱地方品种中雄性不育广泛存在。山东农业大学和山东省章丘市农业局以章丘大葱中发现的雄性不育株为不育源, 育成雄性不育系, 不育株率在95% 以上, 并利用雄性不育系配制了一些杂交组合[2]。有关细胞质雄性不育的细胞学机理研究在拟南芥、大豆、水稻、油菜等作物上已有报道[3- 6], 但国内外对大葱雄性不育研究较少, 对其不育机理尚不十分清楚, 本试验以1 份大葱雄性不育系及其保持系为试材, 采用石蜡切片技术, 观察雄性不育系和相应可育保持系小孢子的发育过程, 探索大葱雄性不育系花粉败育的时期和方式, 以了解大葱的雄性不育细胞学特征及雄性不育机理, 为大葱雄性不育系的研究和应用提供一定的理论依据。 　　 　　1 材料与方法 　　 　　本试验以1 份大葱雄性不育系及其相应保持系( 从章丘大葱中选育而成) 花蕾作为研究材料, 于2005 年7 月24 日取不同生长发育期的花蕾按大小分级后迅速用50% 的FAA 固定液固定24 h, 逐级酒精脱水, 石蜡包埋, 采用常规石蜡切片法制片, 切片厚度10 !m, 番红固绿染色法染色, 用加拿大树胶封片。最后用Olympus BH- 2 型摄像生物显微镜和全色胶卷照相。 　　 　　2 结果与分析 　　 　　2.1 大葱可育系花药和小孢子发育过程的细胞学观察 　　正常可育大葱的花药有4 个花粉囊, 呈蝶形, 花蕾横切面呈三角形, 每一花蕾含有6 个花药, 每一花药4 室。一般将花药发育过程分为造孢细胞期、小孢子母细胞期、四分体期、单核小孢子期、花粉粒成熟期。观察表明, 大葱同一花内的不同花药或同一花药的不同药室, 小孢子母细胞减数分裂多不同步,可分别处于减数分裂各期或四分体期。同一药室,小孢子母细胞减数分裂多为同步。 　　2.1.1 造孢细胞期花药壁由4 种组织细胞层构成, 由外向内分别为表皮、药室内壁、中层、绒毡层,其中绒毡层细胞核大, 细胞质浓, 着色深( 图版1) 。 　　2.1.2 小孢子母细胞期早期花粉母细胞为多边形, 细胞核大, 具有1 个明显的大核仁且被染色较深, 初生壁上已产生胼胝质壁。随着花粉母细胞逐步进入减数分裂, 其间的孢间层逐渐溶解, 细胞相互分开, 变成圆球形。此期的绒毡层细胞较大, 呈四边形且狭长, 成圈状规则排列在小孢子母细胞周围, 有一些细胞为二核, 核大, 着色深且多核仁( 图版2) 。此时中层细胞扁平, 多数中层细胞已解体断裂。 　　2.1.3 四分体期减数分裂形成的四分小孢子由胼胝质所包围, 形成左右对称及十字交叉形的立体结构, 着色深( 图版3) 。 　　2.1.4 单核小孢子期减数分裂后, 包裹着四分小孢子的胼胝质壁解体, 释放出单个的小孢子。四分体小孢子分开时, 绒毡层细胞体积达最大。刚释放出来的小孢子细胞壁很薄, 细胞核位居细胞中央( 图版4) 。单核晚期, 花粉粒壁逐渐加厚且逐渐趋于圆球形, 着色较深, 分散于花粉囊中。此期, 绒毡层细胞开始自我解体。 　　2.1.5 花粉粒成熟期小孢子变圆, 绒毡层细胞消失, 成熟花药的药壁由表皮及具条纹加厚壁的药室内壁组成( 图版5) 。成熟后期, 花药在抗拉力弱的仅由薄壁细胞组成的药室内壁处纵向开裂, 使同侧的2 个花粉囊相连通, 花粉沿裂缝散出。 　　 　　2.2 大葱不育系花药和小孢子发育过程的细胞学观察 　　大葱雄性不育系小孢子母细胞的形态与减数分裂活动正常, 能形成正常的小孢子细胞, 而且绒毡层的活动在此期也没有发生异常, 与可育系的绒毡层相似( 图版6) 。但绝大多数小孢子不能进一步发育成雄配子体而开始败育