姜黄素CTPPPEGPCL胶束制备及体外评价.docVIP

姜黄素CTPPPEGPCL胶束制备及体外评价 　　[摘要] 该研究合成了材料3-羧丙基-三苯基溴化鏻-聚乙二醇-聚己内酯（CTPP-PEG-PCL），并且采用自组装溶剂挥发法制备载姜黄素CTPP-PEG-PCL胶束，芘荧光光谱法测定临界胶束浓度（critical micelle concentration，CMC），考察粒径、包封率、形态、体外释放度；采用MTT实验进行肝星状细胞毒性评价。所得材料CTPP-PEG-PCL经1H NMR表征确证其结构，CMC为2.252 mg·L-1，胶束粒径约为190 nm，含药量为（0.66±0.008） g·L-1，包封率（94±0.6）%，体外释放显示缓释特性，姜黄素胶束对肝星状细胞的生长抑制率显著高于姜黄素原料药（P0.05）。表明CTPP-PEG-PCL胶束临界胶束浓度小，包封率高，肝星状细胞生长抑制效果显著。 　　[关键词] 3-羧丙基-三苯基溴化鏻；聚乙二醇-聚己内酯；胶束；姜黄素；细胞毒性 　　姜黄素是从多年生草本植物姜黄的根茎中提取出来的一种多酚类化合物[1-2]。传统的姜黄素一般都是作为食品染料和添加剂，近年来，有大量的研究表明姜黄素有着广泛的药理作用，比如抗氧化作用，抗炎作用，抗癌作用，抗纤维化等[3-6]。但是姜黄素难溶于水，口服不易吸收，生物利用度低[7]。为了克服这些问题，设计一种有效的给药系统显得尤为重要。 　　聚乙二醇-聚己内酯（PEG-PCL）载药系统具有载药量高、载药范围广、体内滞留时间长、提高药物稳定性和生物利用度、降低毒副作用等特点，不仅可以实现被动靶向给药，还可在表面连接具有特异性识别功能的靶向分子实现主动靶向给药，使药物有效的到达靶点，目前已成为药物传递系统研究的热点之一[8-9]。 　　三苯基磷（TPP）及其衍生物是一类亲脂性阳离子化合物，它们不仅能穿透细胞膜（膜电位差Δψ=-30～60 mV），达到细胞浆内释放，而且可以继续利用细胞内线粒体膜电位差更大（Δψ=-150～180 mV）的特点，在线粒体内累积。现在TPP类化合物作为靶向配基已广泛用于细胞内靶向给药系统，TPPs可与药物化学键连接相接，比如，将抗氧剂辅酶Q与TPP通过化学键相连成MitoQ[10-11]，TPPs也能修饰在纳米载体的表面，例如硬脂酰基三苯基磷（STPP）修饰脂质体表面[12-13]。 　　本研究以3-羧丙基-三苯基溴化鏻 （CTPP）作为靶向基团修饰PEG-PCL，用自组装溶剂挥发法包裹难溶性药物姜黄素，制备CTPP-PEG-PCL载药胶束，进行体外评价。 　　1 材料 　　旋转蒸发仪（天津玻璃仪器厂制造）；SHZ-D（III）循环水式真空泵（巩义市英峪予华仪器厂）；DZF-6020真空干燥箱（上海慧泰仪器制造有限公司）；Tensor 27红外光谱仪（美国Bruker公司）；WFZ UV-2000紫外-可见分光光度计（龙尼柯上海仪器有限公司）；Ζetasizer 3000HS 粒径仪 （英国 Malvern 公司）；Forma 3111水套式CO2培养箱（美国 Thermo Electron公司）；SW-CJ-2FD双人单面超净化工作台（苏州净化设备有限公司）；CKX41倒置相差显微镜 （日本 Olympus公司）；Model 680酶联免疫检测仪（美国 BIO-RAD公司）。 　　姜黄素（纯度98%，西安慈缘生化科技有限公司）；二甲氨基吡啶（DMAP，国药集团化学试剂有限公司）；N，N′-二环己基碳二亚胺（DCC，国药集团化学试剂有限公司）；CTPP（纯度98%，Adamas Reagent Co.Ltd.）；PEG2000（Seebio Biotechnology，Inc.）；mPEG2000（Fluka 公司）；ε-己内酯（纯度99%，Nanqiao Town，Fengxian District，No. 1008 QIGANG Road in Shanghai）；柱色谱硅胶（200～300目，青岛海洋化工厂分厂）；薄层色谱硅胶GF254 （AR，青岛海洋化工有限公司）；噻唑蓝 （MTT，美国Amresco公司）；胰蛋白酶（Trypsin 1∶250，Gibco）；RPMI 1640（美国Gibco公司）；胎牛血清（美国Gibco公司）；肝星状细胞HSC-T6（中国药科大学药理教研室）；其余化学试剂均为AR级。 　　2 方法 　　2.1 CTPP-PEG-OH的合成 　　准确称取CTPP 0.23 g，DCC 0.22 g，DMAP 0.025 g置250 mL圆底烧瓶中，氯仿20 mL溶解，室温搅拌2 h，分批加入PEG2000 0.5 g，氮气保护室温反应3 d，过滤除去不溶性副产物脲，旋转蒸发除去溶剂，冰乙醚沉淀，异丙醇重结晶。硅胶柱