宫颈鳞状细胞癌中DNA损伤修复基因NBS1表达与增殖凋亡相关性分析.docVIP

宫颈鳞状细胞癌中DNA损伤修复基因NBS1表达与增殖凋亡相关性分析 　　[摘要] 目的 研究宫颈鳞状细胞癌中DNA损伤修复基因NBS1表达与增殖、凋亡的相关性。 方法 选择2012年5月～2015年12月在广东省第二人民医院妇科接受活检的宫颈鳞状细胞癌患者78例作为病理组，宫颈良性病变患者60例作为对照组。收集两组患者的宫颈组织后提取RNA并反转录为cDNA，采用荧光定量PCR法检测NBS1以及Ki67、CyclinD1、p27kip1、p57kip2、Fas、FasL、ActD、Caspase-3、Caspase-8、Caspase-9的mRNA相对含量。分析各增殖、凋亡相关基因与NBS1 mRNA含量的相关性。 结果 病理组宫颈组织中NBS1 mRNA相对含量显著高于对照组[（252.5±33.6）比（100.0±14.1），t = 14.292、P 0.05]；病理组宫颈组织中Ki67[（246.4 ± 39.5）比（100.0 ± 12.8）、CyclinD1[（203.4±31.8）比（100.0±15.1）]的mRNA相对含量显著高于对照组且与NBS1 mRNA相对含量呈正相关（r = 0.761、0.683，均P 0.05）；p27kip1[（46.5±7.9）比（100.0±13.8）]、p57kip2[（41.3±5.8）比（100.0±14.2）]、Fas[（35.9±6.8）比（100.0±12.7）]、FasL[（44.1±5.5）比（100.0±14.1）]、ActD[（26.8±3.6）比（100.0±16.7）]、Caspase-3[（38.1±5.8）比（100.0±15.5）]、Caspase-8[（24.2±4.5）比（100.0±11.9）]、Caspase-9[（56.1±7.9）比（100.0±14.6）]的mRNA相对含量显著低于对照组且与NBS1 mRNA的相对含量呈负相关（r = -0.614、-0.705、-0.662、-0.592、-0.783，均P 0.05）。 结论 宫颈鳞状细胞癌中DNA损伤修复基因NBS1的表达量异常升高且与增殖、凋亡相关基因的改变有关。 　　[关键词] 宫颈鳞状细胞癌；NBS1；增殖；凋亡 　　[中图分类号] R737.33 [文献标识码] A [文章编号] 1673-7210（2016）07（c）-0038-04 　　宫颈癌是女性生殖系统最常见的恶性肿瘤，在女性患者中的发病率仅次于乳腺癌，细胞增殖过度以及凋亡不足是疾病发生的关键环节。DNA损伤修复基因NBS1定位于染色体8q21、全长50 kb，所编码的蛋白含有754个氨基酸序列并能够与MRE11及Rad50形成复合体，参与DNA复制和修复、细胞周期调控、端粒稳定性调控等过程[1-2]。近些年，越来越多的研究认识到NBS1基因突变、多态性改变以及表达改变与结直肠癌、肾癌等多种恶性肿瘤的发生有关[3-5]。由此可以推测，NBS1表达的变化可能与宫颈鳞状细胞癌的发生有关，但目前相关的研究仍极为少见。本研究分析了宫颈鳞状细胞癌中DNA损伤修复基因NBS1表达与增殖、凋亡的相关性。 　　1 对象与方法 　　1.1 对象 　　选择2012年5月～2015年12月在广东省第二人民医院（以下简称“我院”）接受宫颈组织病理学活检且确诊为宫颈鳞状细胞癌的78例患者作为病理组，年龄（51.5±6.8）岁、体重指数（22.5±4.1）kg/m2，所有患者均为首次确诊，既往未接受过放化疗，排除远处转移及合并严重肝肾功能不全的患者。选择同期在我院接受宫颈组织病理学活检且确诊为宫颈良性病变的60例患者作为对照组，年龄（52.2±7.1）岁、体重指数（23.1±4.5）kg/m2。两组患者年龄、体重指数比较差异无统计学意义（P 0.05），具有可比性。 　　1.2 方法 　　1.2.1 标本采集 病理组和对照组患者均在宫颈组织病理学活检时取适量宫颈组织，用生理盐水清洗2～3遍，吸尽水分后放置在冻存管中，在液氮中迅速冷冻30 min，取出后保存在-70℃超低温冰箱中。 　　1.2.2 基因表达检测 取宫颈组织，采用购自天根生化科技（北京）有限公司的动物组织总RNA提取试剂盒（DP431）分离得到组织样本中的RNA，而后采用TIANScript Ⅱ RT试剂盒（KR107）将RNA反转录为cDNA，最后将cDNA样本以1∶5的比例稀释并采用RealMaster Mix（SYBR Green）（FP202）进行PCR反应，反应体系如下：稀释后的cDNA样本2 μL、Real Master Mix 10 μL、10 μmol/L的上下游引物各0.8 μL、去离子水6.4 μL。反应条件如下：95℃预变性3