不同倍性鲫鲤鱼Dmc1基因cDNA的克隆及其表达分析.pdfVIP

中国科学 C 辑:生命科学 2007 年 第37 卷 第6 期: 625~633 SCIENCE IN CHINA PRESS 不同倍性鲫鲤鱼Dmc1 基因cDNA 的克隆 及其表达分析 * 陶 敏 刘少军 龙 昱 曾 琛 刘季芳 刘良国 张 纯 段 巍 刘 筠 (湖南师范大学生命科学学院 教育部蛋白质化学与鱼类发育生物学重点实验室, 长沙 410081) 摘要 酵母菌Dmc1(disrupted meiotic cDNA)基因是一个在减数分裂前期Ⅰ表达的特异基因, 其产物是减数分裂同源染色体配对所必需的. 根据酵母菌、小鼠以及人的DMC1 中保守氨基酸序 列合成简并引物, 分别克隆了二倍体红鲫(Carassius auratus red var.) 、湘江野鲤(Cyprinus carpio L.) 、日本白鲫(Carassius cuvieri) 、三倍体湘云鲫和异源四倍体鲫鲤Dmc1 基因部分cDNA 序列. 通 过cDNA 末端快速分离法(RACE)进一步获得了以上5 种鱼Dmc1 的cDNA 全长, 其中红鲫Dmc 1、 湘江野鲤Dmc1 和日本白鲫Dmc1 全长均为1375 bp, 三倍体湘云鲫Dmc1 全长1383 bp, 异源四 倍体鲫鲤Dmc1 全长1379 bp, 这5 种鱼各自都编码342 个氨基酸. 结果表明, 红鲫、湘江野鲤和 日本白鲫的DMC1 蛋白的氨基酸同源性高达97.3%, 说明DMC1 蛋白在这3 种鱼里具有高度保 守性; 而三者与已知序列的人、小鼠和斑马鱼(Danio rerio)DMC1 蛋白的氨基酸同源性分别为 86%, 86%和95%. 以分离得到的不同倍性鱼Dmc1 基因编码区中完全相同的序列设计特异引物进 行表达分析. RT-PCR 结果表明, Dmc1 只在性腺中表达, 在其他组织中不表达; 通过实时荧光定 量PCR(real-time PCR), 对Dmc1 基因在繁殖季节的二倍体红鲫, 三倍体湘云鲫, 四倍体鲫鲤性腺 中的表达进行分析, 发现 Dmc1 在不同倍性鱼的性腺表达有差异, 在卵巢和精巢均表现为: 三倍 体表达最高, 二倍体次之, 四倍体的表达最弱, 特别是在三倍体卵巢的表达远高于在二倍体和四 倍体的表达. 同时, 对这 3 种鱼的性腺进行组织切片分析, 发现二倍体和四倍体鱼的性腺发育良 好, 且四倍体成熟度高于二倍体, 而三倍体鱼性腺发育缓慢未达到性成熟, 特别是卵巢的发育相 当不好. 由此可见, 在不同倍性鲫鲤鱼中 Dmc1 基因也是减数分裂特异的基因, 其表达与倍性无 显著的相关性, 而与性成熟相关; 并且在三倍体卵巢中的过量表达可能与其减数分裂异常及其不 育有关. 关键词 Dmc1 二倍体 三倍体 四倍体 减数分裂 性腺发育 DMC1 蛋白是在真核生物中发现的大肠杆菌(E. 裂所特有的基因, 仅在减数分裂中表达, 是减数分裂 coli)RecA蛋白的同源蛋白, 并且Dmc1 基因是减数分 重组和联会复合体的关键组分[1,2]. 而RecA蛋白的另 收稿日期: 2007-07-09; 接受日期: 2007-08-27 国家杰出青年科学基金( 批准号 : 、国家自然科学基金( 批准号 : 、国家重点基础发展研究计划( 批准号 : 2007CB109206) 、教育部高等学校博士学科专项科研基金(批准号: 200405422001)和教育部长江学者及创新团队计划基金(批准号: IRT0445)资助项 目 *