宁夏水稻品种抗稻瘟病基因Pi―taPi―b和Pi9检测分析.docVIP

宁夏水稻品种抗稻瘟病基因Pi―taPi―b和Pi9检测分析 　　摘要：为明确宁夏水稻品种中抗稻瘟病基因Pi-ta、Pi-b和Pi9的分布情况，为宁夏水稻抗穗颈瘟病的分子标记辅助选择育种奠定基础。利用Pi-ta、Pi-b和Pi9 3个与抗稻瘟病基因紧密连锁的功能标记，对94份宁夏水稻品种进行抗稻瘟病基因的分子检测。结果表明，宁夏水稻品种中含Pi-ta抗性基因的占46.8%，含Pi-b抗性基因的占93.6%，含Pi9抗性基因的占27.7%，同时含有Pi-ta和Pi-b抗性基因的占44.7%，同时含有Pi-ta、Pi-b和Pi9抗性基因的占12.8%。根据报道，Pi-ta、Pi-b基因的联合效应与穗颈瘟抗性正相关系数为0.71，表明从宁夏水稻品种中选育抗穗颈瘟品种是有基因基础的。 　　关键词：水稻品种；稻瘟病；穗颈瘟；Pi-ta基因；Pi-b基因；Pi9基因；抗病基因 　　中图分类号： S435.111.4+1 文献标志码： A 　　文章编号：1002-1302（2016）09-0035-04 　　水稻（Oryza sativa）是世界上最重要的粮食作物之一，其产生的稻谷是全球半数以上人口的主食。由稻瘟病菌（Magnaporthe oryzae；无性态：Pyriculariagrisea）引起的稻瘟病是水稻生产的主要病害之一[1]，严重威胁世界的粮食安全[2-3]。实践证明，利用抗稻瘟病基因培育抗性品种是防治水稻稻瘟病最经济、最有效、最环保的手段[4]。 　　宁夏是我国北方粳稻主产区之一，有悠久的水稻栽培历史，形成了独特而丰富的水稻遗传资源。近年来，随着全球气候变暖，稻瘟病的发生越来越严重，成为宁夏水稻的常发性病害，也是制约宁夏灌区水稻增产的主要病害，每年都有不同程度的发生，主要以穗颈瘟危害为主，尤其是2006―2007年，局部地区甚至有大发生[5]。然而，这些种质资源却没能得到充分利用，其原因首先是这些种质资源的抗稻瘟病基因类型和抗性尚不清楚；其次是常规育种法通常是在抗病性由主效基因控制时才是最有效的，并且存在效率低、工作量大、操作困难等缺点。 　　近年发展起来的分子标记技术可快速、准确地鉴定出材料中所含的抗性基因类型，并利用与稻瘟病抗性基因紧密连锁的分子标记进行分子标记辅助选择育种，这对于培育抗稻瘟病水稻品种有重要意义。目前已定位的抗稻瘟病基因至少有68个位点，总共有83个主效基因，它们成簇地分布在除第3染色体外的所有水稻染色体上[6]，已经有叶瘟、颈瘟、苗瘟共24个抗稻瘟病基因被克隆（根据中国水稻数据中心提供的资料），与其紧密连锁或共分离的分子标记多数都已被开发出来。本研究利用对穗颈瘟抗性贡献较大且相关性较紧密的抗稻瘟病基因Pi-ta、Pi-b、Pi9的紧密连锁的分子标记[7-9]对宁夏水稻品种的抗病基因进行分子检测与分析，旨在研究这3个抗性基因在宁夏水稻品种中的分布情况，为通过分子标记辅助选择育种技术培育抗穗颈瘟的水稻新品种提供参考。 　　1 材料与方法 　　1.1 供试材料 　　选用由宁夏大学、宁夏农业科学院等选育出的94份水稻品种作为供试材料：农科843、宁粳3号、宁粳7号、宁粳9号、宁粳12、宁粳15（作）、宁粳16、宁粳18（作）、宁粳19（作）、宁粳23（作）、宁粳25（作）、宁粳26（作）、宁粳27（作）、宁粳28、宁粳29、宁粳31（作）、宁粳32（作）、宁粳33（作）、宁粳34、宁粳35、宁粳36、宁粳37、宁粳38、宁粳39（作）、宁粳40、宁粳41、宁粳42（作）、宁粳43（李）、宁粳44、宁粳45、宁粳46、宁粳47（节7）、宁稻216、宁香稻1号、宁香稻2号、宁香稻3号、宁香优2号、京宁2号、京宁3号、京宁6号、京宁7号、宁资218、宁资460、节9、节12、花92、花96、花98、花117（作）、中花17、鉴17、鉴1310、鉴1320、鉴11、鉴61、鉴24、鉴1342、鉴1346、鉴1360、2007-218、2009XE-588、2001QX-62、2011-173、2012-731、2012-151、2012-162、2012-336、2012.784（航）、2013-1、2013-409、2013P2-36、2013-1104、2013-1120、2013-1134、11NX-2417、11NX-2324、318、05P3、SD-3、SD-4、毛毛糯、宁糯5号、黑兰稻、小糯稻、养和白皮大稻、大白芒稻、叶盛大皮大稻、小红板稻、小琥板稻、有芒小琥板稻、小白板稻、有芒大琥板稻、大琥板稻、白皮小稻。 　　1.2 试验方法 　　1.2.1 引物合成 PCR特异性引物由生工生物工程（上海）股份有限公司合成，序列见表1。 　　1.2.2 基因组总DNA的提取 利用SDS法提取