补肾生血法对慢性再生障碍性贫血PI-3K、PKB、JNK和NF-κB的影响作用.docVIP

補腎生血法對慢性再生障礙性貧血PI-3K、PKB、JNK和NF-κB的影響作用 孫偉正1 　雍彥禮1　孫岸弢1　王金環1　王晶波1　李榮2　劉娜3 （1.黑龍江中醫藥大學附屬第一醫院　2.北京市雙橋醫院　3.黑龍江中醫藥大學） 【摘要】目的：觀察補髓生血顆粒對慢性再生障礙性貧血（Chronic Aplastic Anemia，CAA）PI-3K、PKB、JNK和NF-κB表達水準的影響，揭示CAA發病的相關機制及補腎生血中藥干預CAA的作用機理，為補腎生血法治療CAA提供理論依據。方法：將60例CAA患者按亂數字表法分成兩組，其中補髓生血顆粒（試驗組）30例，再造生血片（對照組）30例。採用蛋白印跡（Western Blot）法測定CAA患者治療前後骨髓基質細胞中PI-3K、PKB、JNK和NF-κB的表達水準。結果：1.CAA患者PI-3K、PKB和NF-κB均呈低表達，而JNK呈高表達水準；2.補髓生血顆粒能夠不同程度調整上述指標的異常表達，且療後腎陽虛型PI-3K、PKB 和NF-κB表達水平均明顯高於腎陰虛型（P均﹤0.05），而JNK表達水準明顯低於腎陰虛型（P﹤0.05）。結論：1.CAA患者PI-3K、PKB、NF-κB的低表達異常和JNK的高表達異常可能影響了骨髓的造血功能。2.補髓生血顆粒可能通過調節PI-3K/PKB、JNK和NF-κB介導的異常信號轉導通路，抑制骨髓造血乾/祖細胞的凋亡，進而調控骨髓造血，促進造血乾/祖細胞的增殖和分化。 【關鍵詞】貧血　再生障礙性　慢性　補髓生血顆粒　信號轉導 再生障礙性貧血（Aplastic Anemia，AA）作為一種造血負調控亢進「模型」，是一種危害極大的血液系統疑難病症。臨床以貧血、出血和感染為主要表現，有急性和慢性之分。CAA具有起病緩慢，發病隱匿的特點，其病程遷延，纏綿難癒，雖經有效治療病情可獲緩解，但遇誘因常易復發。還有極少數CAA患者在病程中病情出現惡化，轉化為急性再障（Acute Aplastic Anemia，AAA），即重型再障-Ⅱ型（SAA-Ⅱ）。 我們再障課題組經過數十年的臨床和基礎研究，指出「腎虛髓枯」為CAA發病之本，治療上主張以「補腎生血」為主，並根據這一理論研製出補髓生血顆粒應用於臨床，療效顯著。為進一步揭示該藥物治療CAA有關影響造血微環境深層次的作用機理和作用環節，本次研究在以往有關骨髓造血細胞黏附作用研究的基礎上，從分子生物學、蛋白組學和酶學角度深入地探討補髓生血顆粒對CAA造血細胞黏附信號轉導通路的影響，以探討補腎生血中藥治療CAA的療效機理。 1 試驗材料 1.1 試驗物件 慢性再障患者共60例。按亂數字表法分為試驗組30例，其中腎陽虛型17例，腎陰虛型13例；對照組30例。正常對照組10 例，均為非血液系統疾病患者或增生性貧血患者。試驗組和對照組患者在性別、年齡、病程、骨髓增生度等的分佈情況基本一致，經統計學分析，無顯著性差異（P均0.05）。 1.2 診斷標準 1.西醫診斷標準[1] 參照張之南主編《血液病診斷及療效標準》診斷診斷標準診斷 2.中醫証候診斷標準[2] 參照《中藥新藥臨床研究指導原則》（試行）的診斷標準診斷 1.3 試驗用藥 1.試驗組：補髓生血顆粒：由黑龍江中醫藥大學附屬第一醫院制藥廠製備，黑衛藥製字（1997）0048號。 2.對照組：再造生血片：由吉林省遼源亞東製藥廠生產。批准文號：國藥准字2 試驗方法 用Western Blot法測定治療前後CAA患者骨髓基質細胞中PI-3K、PKB、JNK和NF-κB的蛋白表達水準。 3 統計學方法 資料用均數±標準差（±S）表示，計量資料應用t檢驗；等級資料採用秩和檢驗；以P﹤0.05為有顯著性差異。採用SPSS13.0分析試驗結果。 4 結果與分析 4.1 骨髓基質細胞PI-3K的蛋白表達水準 1.試驗組與對照組治療前後骨髓基質細胞中PI-3K的蛋白表達水準（見表1） 表1試驗組與對照組治療前後PI-3K的蛋白表達水準 PI-3K （灰度分析） 組別 例數 療前 療後 試驗組 30 1.380.23△ 2.900.15*▲△ 對照組 30 1.120.09△ 2.450.15*△ 正常組 10 3.400.21 注：與正常組比較△P0.05，▼P0.05；組內治療前後比較*P0.05，■ p0.05；組間治療前後比較▲P0.05，●p0.05；以下P值意義相同。 由表1可見，療前試驗組及對照組PI-3K的蛋白表達水平均低於正常組（P均0.05）；療後試驗組和對照組PI-3K的表達均有升高，與療前比較有顯著性差異（P0.05）；療後試驗組與對照組相比有顯著性差異（P0.05），但仍未達到正常組水準（P0.05）