TGF-β3基因转染成纤维细胞对深II度大鼠烫伤模型创面愈合的影响-烧伤整形专业论文.docxVIP

汕头大学医学院硕士研 汕头大学医学院硕士研究生论文 PAGE PAGE VI 中文摘要 背景与目的 创面愈合是一个复杂的过程，已知有众多的细胞因子参与这一过程， TGF-β是其中最重要的细胞因子之一。本实验采用大鼠深 II 度烫伤模型，构建含 TGF-β3 cDNA 的 PLASTN 质粒，转染受体成纤维细胞，移植于创面。同时采用 EGF 及磺胺嘧啶 银粉作为治疗药物，观察深 II 度烫伤大鼠创面的组织形态学变化，创面愈合率，创面含水 量及其 TGF-β1，TGF-β2 及 TGF-β3 蛋白在创面组织的表达情况；评估深 II 度烫伤模型 继续作为进一步转基因动物实验研究模型的可行性；探讨 TGF-β3 基因转染的成纤维细胞 在创面愈合中的影响。 材料与方法 清洁级成年 Wistar 大鼠 90 只，随机分为 3 组，模型对照组、表皮转化 生长因子组和 TGFβ3 转基因成纤维细胞组。麻醉大鼠，将皮肤浸泡在 80℃水中 15s。1） C 组：在烫伤后不同时间点将创面描记在半透明纸上，然后创面外用磺胺嘧啶银粉；2） EGF 组：处理同对照组外，创面外用 20μg/L EGF；3）TGF-β3 组：处理同对照组外，创 面用含 TGF-β3 转基因成纤维细胞。烫伤后不同时间分别活杀，取烫伤区域全层皮肤，HE 染色观察创面组织变化，用半透明纸法折算创面愈合率，用干湿重法计算创面含水量，SP 法观察大鼠烫伤皮肤组织中 TGF-β1、β2 及β3 的表达情况，用图像分析软件测定 TGF- β1、β2 及β3 的平均光密度值。并采用方差分析、相关分析对上述指标进行统计分析。 结果 ①动物情况及创面观察：烫伤后一两天银粉组创面稍有肿胀，可见少量渗出及 创周红肿。②创面愈合率比较：烫伤后 7 天，愈合率 EGF 组 TGF-β3 组银粉组。烫伤 后 14 天，愈合率 TGF-β3 组EGF 组银粉组。烫伤后 21 天，愈合率 TGF-β3 组EGF 组银粉组。③创面含水量比较：烫伤后 21 天 TGF-β3 组与银粉组之间有显著差异性。④ 病理组织学观察：烫伤 1 天组织切片可见典型深 II 度烫伤创面，烫伤后 14 天，结缔组织 成纤维细胞明显增生，EGF 组及 TGF-β3 组痂皮下开始有上皮生长；烫伤后 21 天，组织 内仍可见少量炎症细胞浸润。⑤TGF-β1 在皮肤组织表达结果：烫伤后 7 天，EGF 组与 TGF- β3 组之间有显著差异性；烫伤后 14 天，银粉组、EGF 组与 TGF-β3 组之间差异有显著 性；烫伤后 21 天，银粉组、EGF 组与 TGF-β3 组之间有显著差异性。⑥TGF-β2 在皮肤 组织表达结果：烫伤后 7 天，14 天，银粉组、EGF 组与 TGF-β3 组之间差异有显著性。 烫伤后 21 天，银粉组、EGF 组与 TGF-β3 组之间有显著差异性。⑦TGF-β3 在皮肤组织 表达结果：烫伤后 1 天、3 天、7 天、14 天及 21 天，TGF-β3 组与银粉及 EGF 组之间均 有显著差异性。⑧相关分析结果表明：创面面积愈合率与 TGF-β3 的 MOD 值呈正相关； 而其与创面含水量、TGF-β1 的 MOD 值、TGF-β2 的 MOD 值呈负相关。 结论 ①本实验制作深大鼠 II 度烫伤模型的方法简便，重复性好。②本次实验采用创 面愈合率作为衡量愈合面积的指标，反映了三个组在不同烫伤时间内的不同愈合情况。③ TGF-β1、β2 及β3 主要表达于成纤维细胞的胞浆及胞膜。MOD 值较准确地反映了上述 三个指标表达的情况。④TGF-β1、β2 在 TGF-β3 组的表达明显低于银粉组与 EGF 组， TGF-β3 组的创面愈合率明显高于银粉组与 EGF 组，说明 TGF-β3 转基因转染成纤维细 胞可能通过在创面上持续分泌 TGF-β3 蛋白，下调 TGF-β1 及 TGF-β2 的表达。 V VII Abstract Background and objective: Wound healing is a very complicated process. Deep secondary rat burn model was adopted in this experiment. And then the fibroblasts were transfected and transplanted onto the wound surface. Two drugs were used to treat the burnt rat. Material and methods: Ninety adult Wistar rats of clean level were used in the ex