TLR-4介导抵抗素调节人脐静脉内皮细胞纤溶因子PAI-1、t-PA的表达内科学(心血管内科)专业论文.docxVIP

汕头大学医学院硕士学位论文 汕头大学医学院硕士学位论文 汕头大学医学院硕士学位论文 汕头大学医学院硕士学位论文 I I PAGE PAGE IV 摘 要 背景 血栓性疾病严重威胁人类的生命健康，其发病率高居各类疾病之首，且近年来还有渐 增之势，是当代医学研究的重点和热点之一。抵抗素（resistin）作为一种新近发现的脂肪 因子，与以中心性肥胖、胰岛素抵抗为主要特征的代谢综合征（metabolic syndrome, MetS） 及心血管疾病的发生发展密切相关。Toll 样受体-4（toll like receptor-4, TLR-4）作为机体天 然免疫的受体，参与众多心血管疾病的发生发展。纤溶活性调节物质，组织型纤溶酶原激 活物（tissue plasminogen aetivator, t-PA）及纤溶酶原激活物抑制物-1（plasminogen activator inhibitor-1, PAI-1）在血栓的形成过程中发挥重要的作用。本课题组前期研究表明，抵抗素 可作用于体外培养人脐静脉内皮细胞(human umbilical vein endothelial cells, HUVECs)导致 PAI-1、t-PA 这对纤溶因子表达失衡，从而抑制纤溶系统，但其作用受体尚不明确。据最新 研究发现，抵抗素可与炎症刺激物脂多糖（1ipopoysaccharide, LPS）竞争 TLR-4 调节细胞 因子的表达。然而抵抗素、TLR-4 与 PAI-1、t-PA 这对纤溶因子的作用关系目前尚未见报 道。 目的 体外培养 HUVECs，观察用 Toll 样受体-4 抗体(antibody to TLR-4, AbTLR-4)阻滞 TLR-4 后，是否能减弱抵抗素所引起的纤溶因子 PAI-1、t-PA 蛋白和 mRNA 水平的变化，进一步 探索抵抗素在 HUVECs 的信号转导通路，从而揭示血栓性疾病发生、发展的新机制，为血 栓性疾病的防治提供新的理论依据和思路。 方法 1. 培养 3-5 代 HUVECs，将其分为单纯培养基对照（control）组，resistin（50ng/ml）组， AbTLR-4（1ug/ml）组，resistin（50ng/ml）+AbTLR-4（1ug/ml）组，培养 48h 后，酶 联免疫吸附（enzyme linked immunosorbent assay, ELISA）法检测各组上清液中 PAI-1 和 t-PA 蛋白水平。 2. 培养 3-5 代 HUVECs，将其分为单纯培养基对照组（control），resistin（50ng/ml）组， AbTLR-4（1ug/ml）组，resistin（50ng/ml）+AbTLR-4（1ug/ml）组，培养 48h 后，实 时 反 转 录 多 聚 酶 链 反 应 （ real-time reverse transcription polymerase chain reaction, real-time RT-PCR）法检测各组总 RNA 中 PAI-1 和 t-PA mRNA 水平。 结果 1. resistin（50ng/ml）组较 control 组 PAI-1 蛋白水平显著升高（P0.05），t-PA 蛋白水平 无显著变化； resistin（50ng/ml）+AbTLR-4（1ug/ml）组较 resistin（50ng/ml）组 PAI-1 蛋白水平显 著下降（P0.01），t-PA 蛋白水平无显著变化； resistin（50ng/ml）组较 control 组 PAI-1 mRNA 水平显著升高(P0.05)，t-PA mRNA 水 平无显著变化； resistin resistin（50ng/ml）+AbTLR-4（1ug/ml）组较 resistin（50ng/ml）组 PAI-1 mRNA 水平下降（P0.01），t-PA mRNA 水平无显著变化。 结论 1. 在体外培养的人脐静脉内皮细胞中，高浓度抵抗素可显著提高 PAI-1 的表达，而对 t-PA 的表达无显著影响，从而抑制纤溶系统活性，促进血栓形成。 2. TLR-4 可能为抵抗素的一个作用受体，在体外培养的人脐静脉内皮细胞中，介导抵抗 素引起的 PAI-1 的表达增加。 关键词 血栓性疾病；抵抗素；Toll 样受体-4；纤溶酶原激活物抑制物-1；组织型纤溶酶 原激活物 III III PAGE PAGE IV ABSTRACT Background The prevalence of thrombotic diseases is leading among all diseases and keeps rising, which has attracted