SpA单结构域突变体组合噬菌体文库的构建及体外进化筛选-病理学与病理生理学专业论文.docxVIP

万方数据 万方数据 论 文 工 作 时 间 ： 2013 年 9 月 至 2015 年 1 月 学位论文独创性声明 本人所呈交的论文是我个人在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成 果。据我所知，除了文中特别加以标注和致谢的地方外，论文中不包含其他人已 经发表或撰写过的研究成果。与我一同工作的同志对本研究所做的任何贡献均已 在论文中作了明确说明并表示谢意。 学位论文作者签名： 日期： 学位论文使用授权声明 本人完全了解安徽医科大学有关保留、使用学位论文的规定：学校有权保留 学位论文并向国家主管部门或其指定机构送交论文的电子版和纸质版，有权允许 论文进入学校图书馆被查阅，有权将学位论文的内容编入有关数据库进行检索， 有权将学位论文的标题和摘要汇编出版。愿意将本人的学位论文提交《中国博士 学位论文全文数据库》、《中国优秀硕士学位论文全文数据库》和《中国学位论 文全文数据库》中全文发表，并可以以电子、网络及其他数字媒体形式公开出版， 并同意编入 CNKI《中国知识资源总库》，在《中国博硕士学位论文评价数据库》 中使用和在互联网上传播。保密的学位论文在解密后适用本规定。 学位论文作者签名： 导师签名： 日期： 日期： 目 录 缩略词表1 中文摘要2 英文摘要4 前言6 第一部 SpA 单结构域突变体组合文库的构建 8 一、 材料与方法9 二、 实验结果16 三、 讨论21 第二部 用人 IgG 对 SpA 单结构域突变体组合文库的体外进化筛选… 23 一、 材料与方法24 二、 实验结果28 三、 讨论34 参考文献36 附录39 致谢40 综 述 41 安徽医 安徽医科大学硕士学位论文 缩略词表 英文缩写 英文全称 中文名称 Ampr ampicillin resistant 氨苄青霉素抗性 bp base pair 碱基对 DAB diaminobenzidine 二氨基联苯胺 dNTP deoxynucleotide triphosphate 脱氧三磷酸核苷 EB ethidium bromide 溴化乙锭 ELISA enzyme linked immunosorbent assay 酶联免疫吸附试验 h hour 小时 HRP Horseradish peroxidase 辣根过氧化物酶 IFN-α-2b interferon-alpha-2b 干扰素 α-2b Ig immunoglobulin 免疫球蛋白 IPTG Luria-Bertani medium 异丙基-B-D-硫代半乳糖 Kana kanamycin 卡那霉素 LB Luria-Bertani medium LB 培养基 min minute 分钟 ml microliter 毫升 PBS Phosphate buffered saline 磷酸缓冲液 PCR polymerase chain reaction 聚合酶链式反应 rpm rotation per minute 每分钟转速 s second 秒 SDS sodium dodecyl sulphate 十二烷基磺酸钠 SDS SDS-polyacrylamide gel electrophoresis SDS-聚丙烯电泳 TE Tris/EDTA buffer Tris/EDTA 缓冲液 Tet tetracycline 四环素 Tris N-tris(hydroxymethyl)aminomethane N-三(羟甲基)氨基甲烷 TU Transformation unit 转化单位 U unit 单位 1 摘 要 免疫球蛋白结合蛋白(immunoglobulin (Ig)-binding proteins，IBPs)是由多种病原 菌产生，与免疫球蛋白之间以非抗原形式结合，是一种重要的致病因子。其中代 表分子包括有部分大消化链球菌表面蛋白 L(Peptostreptococcus magnus protein L， PpL) 、链球菌(C 群和 G 群)蛋白 G (Streptococcal protein G，SpG) 和金黄色葡萄 球菌蛋白 A(Staphylococcal protein A，SpA)等等。这类分子是由数目不同的功能相 似的单结构域组合形成。因其独特结合特性，该类分子在抗体纯化、鉴定，抗体 吸附治疗和病原体特异性抗体检测等方面应用广泛。 利用体外分子进化获得了由 SpA A Ig 结合结构域和 SpA C Ig 单结构域随机重新组 合构成的重组分子 SpA-AC，该分子是由 SpA 中的 E、D、A、B、C 和 SpG 中的 B2、B3 各单结构域随机重组后，利用噬菌体展示技术筛选出来的具有高结合活性 的重组 IBPs。因此，为了获得具有更高结合活性的免疫球蛋