Stathmin表达沉默鼻咽癌细胞株的建立及其生物学特性初探-病理学与病理生理学专业论文.docxVIP

目 录 Stathmin 表达沉默鼻咽癌细胞株的建立及其生物学特性初探…………1 中文摘要……………………………………………………………………1 ABSTRACT ………………………………………………………………… 2 英汉缩略词对照表 ………………………………………………………4 前言…………………………………………………………………………5 1 材料与方法………………………………………………………………7 1.1 实验材料与仪器………………………………………………………7 1.2 实验方法 ……………………………………………………………10 2 结果 ……………………………………………………………………24 3 讨论 ……………………………………………………………………30 4 结论 ……………………………………………………………………33 参考文献 …………………………………………………………………33 综述 ………………………………………………………………………37 攻读学位期间发表的学术论文目录 ……………………………………48 致谢 ………………………………………………………………………48 PAGE PAGE 1 Stathmin 表达沉默鼻咽癌细胞 株的建立及其生物学特性初探 中 文 摘 要 目的：构建stathmin-siRNA重组质粒表达载体，建立stathmin表达沉 默鼻咽癌5-8F细胞株，探讨stathmin沉默对鼻咽癌5-8F细胞的增殖、周期 和成瘤性的影响，为鼻咽癌的基因治疗提供实验依据。 方法：（1）合成stathmin特异性siRNA片段，片段插入pGenesil-1.1质 粒表达载体构建重组质粒表达载体。（2）重组质粒表达载体转染，RT-PCR 和Western blotting鉴定，建立stathmin稳定抑制表达5-8F细胞株。（3） MTT实验分析细胞的增殖，流式细胞仪分析细胞的周期。（4）裸鼠移植瘤 实验分析肿瘤细胞的成瘤性。 结果：(1)获得了 stathmin siRNA pGenesil-1.1 重组质粒表达载体和 stathmin 沉默的鼻咽癌 5-8F 细胞株。（2）Stathmin 沉默 5-8F 细胞株孵育 48、72 和 96 h，细胞增殖抑制率分别为（33.67±2.52）%，（28.33±1.15）%， （31.67±1.53）%，与阴性对照组分别为（8.13±0.60）%，（3.20±0.53）%， （3.97±0.15）%和空白对照组（0）比较，差异有显著性(p＜0.01)。（3） Stathmin 沉默组 G2 期细胞为（15.8±0.55）%，与阴性对照组（11.3±0.79）% 和空白对照组（10.9±0.92）%比较，差异有显著性（P＜0.05）。（4）Stathmin 沉默组，裸鼠移植瘤重量为（0.32±0.21）g，与阴性对照组（1.10±0.40） g 和空白对照组（1.52±0.30）g 比较，差异有显著性（P＜0.05）。 结论：（1）成功构建stathmin-siRNA重组质粒表达载体。（2）建立了 stathmin稳定抑制表达的5-8F细胞株。（3）Stathmin沉默抑制5-8F细胞的 恶性生物学表型。 关键词：鼻咽癌；5-8F细胞；stathmin；沉默；RNA干扰 ESTABISHMENT OF STATHMIN SILENCING NASOPHARYNGEAL CARCINOMA CELL LINE AND EXPLORTION OF ITS BIOLOGICAL CHARACTERISTICS ABSTRACT Objective:To construct the stathmin-siRNA recombinant plasmid express- ion vector,build stathmin silence the nasopharyngeal carcinoma 5-8F cell lines, study the effects of stathmin silencing on nasopharyngeal carcinoma 5-8F cell proliferation,cycle and tumorigenicy,and provide the experiment basis for nasopharyngeal carcinoma gene therapy. Methods: (1) Synthesize stathmin specific siRNA fragment,and the Frag- ment was inserted into pGenesil-1.1 plasmid