TIMP-3在肝癌细胞中的表达及其CpG岛的甲基化状况研究 内科学专业论文.docxVIP

TIMP-3 TIMP-3 在肝癌中的表达及其 CpG 岛的甲基化状况研究 广州医 广州医科大学硕士学位论文 PAGE PAGE 13 PAGE PAGE 10 中英文对照缩略词表 Abbreviation 英文缩写 英文全称 中文全称 HCC Primary hepatocellular carcinoma 原发性肝癌 TIMP-3 Tissue inhibitorofmetalloprotein-3 金属蛋白酶组织抑制因子-3 ECM  extracellular matrix 细胞外基质 MMPs matrix metalloproteinase  基质金属蛋白酶 DNMTs DNA methyltransferases DNA 甲基转移酶 5-Aza-CdR 5-Aza-2’-deoxycytidine 5-杂氮-2’-脱氧胞苷 PBS phosphate buffer solution 磷酸盐缓冲液 dNTP Deoxyribonucleoside triphosphote 脱氧核糖核酸 DNMTs DNA methyltransferases DNA 甲基化转移酶 bp Base pair 碱基对 DMSO dimethyl sulfoxide 二甲基亚砜 PCR polymerasechain reaction 聚合酶链反应 mRNA Messager RNA 信使 RNA OD Opital density 光密度 FBS Fetal bovine serum 胎牛血清 EB Ethidium bromide 溴化乙锭 GAPDH Glyceraldehyde-3-phosphate dehydrogenase 甘油醛-3-磷酸脱氢酶 EDTA Ethylene Diamine Tetraacetic Acid 乙二胺四乙酸 DNA Deoxyribonucleic acid HYPERLINK /view/23560.htm 脱氧核糖核酸 cDNA Complementary deoxyribonucleic acid HYPERLINK /view/23560.htm 互补的脱氧核糖核酸 DEPC diethyl pyrocarbonate 焦碳酸二乙酯 μmol micromole 微摩尔 mmol millmole 毫摩尔 TBE Tris-base-boric acid-EDTA buffer  Tris 硼酸缓冲液 TIMP-3 在肝癌中的表达及其 CpG 岛的甲基化状况研究 硕士研究生：曾伟 导师：聂玉强教授 中文摘要 研究背景及目的 原发性肝癌是严重危害人类健康的疾病之一，复发和转移是肝癌患者预后差、 死亡率高的主要原因。它的发生、发展是一个多阶段的过程，涉及多个基因的改 变。目前缺乏行之有效的早期诊断和防治措施。阐明其分子发病机制和致病基因， 对于开发新的诊疗措施至关重要。现有研究表明，在肝癌的发生、发展过程中存 在着多种抑癌基因 CpG 岛的异常甲基化现象，干扰抑癌基因的表达，导致细胞异 常增殖，引起起细胞癌变。 本研究通过对不同肝癌细胞株中 TIMP-3 mRNA 的表达及其 CpG 岛甲基化状态的 检测，初步分析 TIMP-3 基因甲基化水平对 mRNA 表达的影响。并使用去甲基化药 物 5-杂氮-2’脱氧胞苷对甲基化阳性的细胞株进行干预，观察该药物对肝癌细胞株 中 TIMP-3 基因表达及其 CpG 岛甲基化程度的影响。 方法 运用荧光定量 PCR 检测 12 例肝癌癌旁组织及 8 株肝癌细胞系中 TIMP-3 表达 情况。使用 MSP 定性检测 8 株肝癌细胞株、25 例肝癌组织及 23 例癌旁组织中 TIMP-3 CpG 岛甲基化状况。使用去甲基化药物 5-杂氮-2’脱氧胞苷对甲基化阳性 的细胞株进行干预，观察干预组与对照组 TIMP-3 基因表达差异，并使用焦磷酸测 序技术定量检测 CpG 岛甲基化差异。 结果 研究发现 8 株肝癌细胞中 TIMP-3 mRNA 表达均显著低于肝癌旁组织（P0.01）。 而且在 8 株肝癌细胞系中有 C3A、Hep-3B、HepG2 3 株检测到 TIMP-3 CpG 岛甲 基化阳性，经去甲基化药物干预后，经去甲基化药物干预后，在这 3 株肝癌细胞 中均发现 TIMP-3 mRNA 的表达较对照组有明显上调(P0.05)，CpG 岛的甲基化率 下降(P0.05)。在 25 例肝癌组织中有 9 例出现了甲基化（36%），23 例癌旁组织中 有 5 例出现了甲基化（21.7%），两者比较无统计学差异(P=0.349)。 结论： 1、TIMP-3 启动子区域 CpG 岛甲基化是其在肝癌细胞株中表达降低的原因之 一，而且甲基转移