T1DM大鼠脑组织MLCK对大脑的影响及何首乌干预作用的观察-临床检验诊断学专业论文.docxVIP

贵阳医学院 贵阳医学院 2013 届硕士研究生论文 T1DM 大鼠脑组织 MLCK 对大脑的影响及何首乌干预作用的观察 摘要 目的: 探讨糖尿病脑组织中 MLCK 与 IL-6、TNF-α的相关性及其与大脑功能损害的关系， 并分析何首乌在这一过程中可能起到的干预作用，为进一步研究 MLCK 在 TIDM 脑 功能障碍发生发展中的作用机制以及中药对 T1DM 脑功能障碍的预防和治疗提供 新的思路。 方法： 1. 构建 T1DM 模型 健康成年雄性 SD 大鼠随机分为空白对照组、糖尿病组，后 者腹腔注射 STZ（50mg/kg STZ 诱导,注射 STZ 溶液 72 小时后空腹血糖≥ 16.7mmol/L,且连续三周其空腹血糖保持在 16.7 mmol/L 以上视为 T1DM 大鼠模型 复制成功），诱导产生 T1DM 大鼠模型,依据模型建立成功后，糖尿病组进一步分 为糖尿病对照组、低剂量何首乌干预组、高剂量何首乌干预组三个亚组，分别灌 以蒸馏水、低剂量何首乌［1.0g/（㎏·d）］、高剂量何首乌［2.0g/（㎏·d）］， 空白对照组灌以相应体积的蒸馏水。 2. 12 周应用 Morris 水迷宫实验检测各组大鼠的认知功能，透射电子显微镜观 察各组大鼠脑组织的超微结构，酶联免疫吸附法（ELISA 法）检测各组大鼠脑组 织中 MLCK、IL-6、TNF-α的表达水平。 结果： 1. Morris 水迷宫实验结果显示，随着糖尿病病程的进展，糖尿病对照组大鼠出 现认知功能障碍。到 12 周的时候，与空白对照组比较，认知功能明显受损，具 有统计学意义（P0.05）；与糖尿病对照组比较，高剂量何首乌干预组的认知功 能明显好转，具有统计学意义（P0.05），而糖尿病对照组和低剂量何首乌干预 组没有明显差异。 1 PAGE PAGE 2 2. 透射电镜结果显示，与空白对照组比较，糖尿病对照组大脑组织毛细血管变 形,血管周围水肿，胶质细胞胞浆出现水肿，空泡样变明显增多。与糖尿病对照 组比较，高剂量何首乌干预组血管周围未见明显水肿,可见内皮细胞连续，胶质 细胞形态趋向正常，空泡样变明显减少，神经元细胞形态趋向正常，线粒体未见 肿胀；低剂量何首乌干预组血管周围轻度水肿，胶质细胞线粒体轻微水肿，神经 元细胞器分布比较不均。 3. ELISA 法检测结果显示，与空白对照组比较，糖尿病对照组大鼠脑组织中的 MLCK、IL-6、TNF-α的表达水平升高，具有统计学意义（P0.05）；与糖尿病对 照组比较，高剂量何首乌干预组大鼠脑组织中的 MLCK、IL-6、TNF-α的表达水 平降低，具有统计学意义（P0.05），而低剂量何首乌组干预组大鼠脑组织中的 MLCK、IL-6、TNF-α的浓度没有明显变化。 4.Pearson 相 关 分 析 结 果 显 示 ， MLCK 和 IL-6 的 表达水 平 呈 正 相 关 关 系 （ P0.01,r=0.794 ）； MLCK 和 TNF- α 的 表 达 水 平 呈 正 相 关 关 系 （P0.01,r=0.845）；IL-6 和 TNF-α表达水平呈正相关关系（P0.01,r=0.812）。 结论： 1. 随着糖尿病的发展，T1DM 大鼠的认知功能受损，脑组织的超微结构发生改变， 高剂量何首乌进行干预，能够改善 T1DM 大鼠的认知功能和脑组织超微结构。 2. 糖尿病脑组织中的 MLCK、IL-6 和 TNF-α的表达存在正相关，由于 MLCK 存在 于大脑组织中的血管壁，有文献报道 IL-6 和 TNF-α与血脑屏障（BBB）的病变 有关，因此推断，MLCK、IL-6 和 TNF-α表达的改变影响 BBB 的通透性，从而造 成 T1DM 大鼠认知功能障碍；何首乌通过降低 TIDM 大鼠脑组织 MLCK、IL-6 和 TNF- α的表达，可对脑组织起到保护作用。本研究为中药对 T1DM 脑功能障碍的预防 和治疗提供新的思路。 关键词：T1DM；肌球蛋白轻链激酶；炎性因子；血脑屏障；何首乌；相关性 前言 进入 21 世纪以来，糖尿病患病率逐年成倍增长，已经成为全球性的公共卫 生难题之一，根据国际糖尿病联盟(IDF)2012 年最新统计数据，全球糖尿病患病 率约为 8.3%，患病人数高达 3.7 亿[1]。中国科学家发表于《新英格兰医学杂志》 的调查指出，10%的中国成人已患上该病，另有 16%处于糖尿病边缘,这一比例直 逼美国 11%的发病率，超过德国、加拿大等发达国家,中国目前的糖尿病患者人 数约达到 1.2 亿，已经取代印度，成为世界上糖尿病人数最多的国家[2]。糖尿病 是一种以血糖升高为特征的代谢紊乱综合征，损害心脑血管、肾脏、眼、神经等 全身各组织器官，其发生和发展是导致糖尿病患者死亡的主要原因[3]。