TIM-3分子在器官移植免疫中的作用基础和临床研究初探-器官移植专业论文.docxVIP

MP Methlprednisone 甲基强的松龙 Pred Prednisone 强的松龙 CsA Cyclosporine A 环孢素 A ATN Acute Tubular Necrosis 急性肾小管坏死 OD Optic Density 光密度 CMV Cytomegalovirus 巨细胞病毒 ATG Antihuman Thymocyte Globulin 兔抗人胸腺细胞免疫球 蛋白 DEPC Diethyl pyrocarbonate 焦炭酸二乙酯 ROC Receiver Operating Characteristic 受试者工作特征 AUC Area Under Curve 曲线下面积 摘要 1 肾移植患者术后外周血 TIM-3 mRNA 水平的检测对急性 排斥反应的诊断及预后判断的价值 目的：考察 TIM-3 mRNA 表达水平的监测在肾移植术后急性排斥反应的 诊断和预后评估方面的作用，为肾移植后急性排斥反应的无创性诊断寻求潜 在的新的预警分子。 方法：本研究中包含 AR 组 (急性排斥反应组，n=24)，NO-AR 组 (非急 性排斥组，n=20)。连续留取手术后血液样本（术后 1，4，7，14，21 天）和 急性排斥反应时血液样本（冲击治疗前、治疗后 1，4，7 天）。另肾移植术后 满 1 年，肾功能良好患者作为 Stable 组（肾功能稳定组，n=18）以进一步对 照。RT-PCR 的方法检测 TIM-3 mRNA 的表达水平。ROC 曲线检验 TIM-3 mRNA 表达水平在诊断急性排斥反应时的灵敏度和特异度。相关性分析考察 TIM-3 mRNA 表达与肾移植术后血肌酐水平的关系。 结果：TIM-3 mRNA在急性排斥反应发生时表达水平明显升高，与NO-AR 组 和 Stable 组相比均有显著性差异（286.72±86.28 vs 126.10±28.31，286.72 ±86.28 vs 96.91±17.88, p=0.00）。ROC曲线分析TIM-3 mRNA表达水平在诊断 急性排斥反应时的灵敏度和特异度分别可达到 90.91% 和 90.00%。抗排斥治 疗后TIM-3 mRNA表达水平下降。TIM-3 mRNA表达水平与肾移植术后血肌 酐水平有较好的相关性( r2= 0.716, p=0.00)。 结论：肾移植术后患者外周血中 TIM-3 mRNA 表达水平的检测可以作为 无创诊断急性排斥反应的指标。但是 TIM-3 mRNA 在急排冲击治疗后的表达 趋势并不能判定急性排斥反应的预后，这主要是因为 TIM-3 mRNA 在急性排 斥患者不同个体间表达差异很大所致。 关键词：TIM-3，肾移植，免疫监测 摘要 2 Galectin-9 腹腔注射对同种异体小鼠皮肤移植物存活的影 响及可能的分子机制 目的：研究 TIM-3 分子配体 Galectin-9 腹腔注射对同种异基因小鼠移植 皮片存活的影响；并初步研究其对体内 Teff 和 Treg 免疫平衡的调控作用。 方法：60 只C57BL/6 小鼠（受者），30 只BALB/c小鼠（供者），建立同种 异基因小鼠皮肤移植模型。对照组C57BL/6 小鼠术后连续 7 天给予生理盐水 腹腔注射；实验组C57BL/6 小鼠术后连续 7 天给予Galectin-9 100ug 腹腔注射。 术后连续记录并留取影像资料以观察移植皮片的存活时间，累积生存函数计 算皮片MST（Median Survival Time，中位存活时间）；术后 7 天移植皮片HE 染色观察皮片内的淋巴细胞浸润情况；FCM（流式细胞术）检测小鼠脾脏、 外周血 CD4+TIM-3+T、CD4+TIM-1+T、Th17、CD4+CD25+Foxp3+ Treg 所占 T淋巴细胞亚群的比例；ELISA法检测外周血细胞因子IL-2、IL-4、IL-17 及 IFN-γ的表达水平。 结果： 1. Galectin-9 腹腔注射可以延长同种异体小鼠皮肤移植物的存活时间，对 照组和实验组移植皮片的 MST 分别为 12.5 天和 16 天； 2. Galectin-9 腹腔注射减轻同种异基因皮肤移植术后第 7 天移植皮片内的 淋巴细胞浸润； 3. Galectin-9 腹腔注射对体内 Teff 细胞比例有下调的作用，但对 Treg 细 胞比例无影响。不同淋巴细胞亚群变化如下： ① CD4+TIM-3+T 实验组术后 7 天脾脏组织和外周血的比例均下降（脾 4.82±1.01% vs 2.84±0.89%，血 7.13±1.82% vs 4.94± 1.56%，p0.05）；术后 14 天无差异（脾 3.34±1.10% vs 3.44±0.98%，血 2.79± 0.87% vs 2.67±