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对临床检测HBV―DNA筛查隐匿性HBV携带者探讨 　　【摘要】 目的：探讨乙型肝炎病毒（HBV-DNA）阳性感染者临床所出现血清学指标的各种组合模式，以期筛选出更多的隐匿性HBV携带者。方法：采用酶联免疫吸附试验（ELISA法）检测乙肝病毒血清学标志物（乙肝两对半），采用实时荧光定量PCR法检测HBV-DNA。结果：通过对HBV-DNA阳性感染者血清学指标多种组合模式的分析，HBsAg阴性并不一定表示没有HBV感染。结论：HBsAg作为传统筛查是否感染乙肝的指标是不够的，当HBcAb阳性、肝功能指标（ALT、AST为主）显示异常时均需要进一步做HBV-DNA检查，且HBeAg阴性并不意味着HBV被清除或复制水平的降低，需做深入的HBV-DNA检查。 　　【关键词】 乙型肝炎病毒； DNA； 肝功能 　　中图分类号 R512.62 文献标识码 B 文章编号 1674-6805（2015）13-0062-02 　　doi：10.14033/j.cnki.cfmr.2015.13.030 　　乙型肝炎病毒（HBV）属于嗜肝DNA病毒科正嗜肝DNA病毒，为不完全双链环状DNA。HBV感染后临床表现呈多样性，可表现为重症肝炎、急性肝炎、慢性肝炎或无症状携带者，其中部分慢性肝炎可演变成肝硬化或肝癌。乙肝两对半是目前实验室检测乙型肝炎最常用的方法，其采用酶联免疫吸附试验（ELISA）具有高灵敏度和特异性但操作繁琐，耗时较长且只能用于定性及半定量测定。而HBV-DNA检测则是采用聚合酶链（PCR）技术，特异性扩增乙肝病毒基因组上特定基因片段，其检测相对更特异、快速、灵敏，且能准确定量，但相对成本高，需要高级的试验设备[1]。本文通过对595例HBV-DNA阳性患者的乙型肝炎病毒血清学指标出现的组合模式进行统计分析，发现HBV-DNA阳性感染者血清学指标存在多种组合，分为HBsAg阳性和HBsAg阴性两类患者。 　　1 资料与方法 　　1.1 一般资料 　　2014年间笔者所在医院门诊、住院及体检人群血清标本，HBV-DNA定量检测阳性5.000E+02 IU/ml 595例，年龄7～62岁，平均34.5岁。 　　1.2 试剂与仪器 　　乙肝两对半检测采用酶联免疫吸附试验（ELISA法），其基本方法是将已知的抗原或抗体吸附在固相载体（聚苯乙烯微量反应板）表面，使酶标记的抗原抗体反应在固相表面进行，用洗涤法将液相中的游离成分洗除。常用的ELISA法有双抗体夹心法和间接法，前者用于检测大分子抗原，后者用于测定特异抗体，本试验检测试剂由上海科华提供。HBV-DNA检测采用实时荧光定量PCR法，它是一种在DNA扩增反应中，以荧光化学物质测每次聚合酶链式反应（PCR）循环后产物总量的方法。本试验使用安捷伦Mx3000P荧光定量PCR分析仪，数值由艾迪康医学检验中心提供。 　　2 结果 　　通过对595例HBV-DNA阳性患者的乙肝病毒血清学指标出现的组合模式统计分析后总结，详见表1。 　　3 讨论 　　乙肝是我国目前流行广泛，危害严重的一种传染病[2]。当HBV感染人体时一部分对HBV特异性免疫力低下的人会引起以肝细胞免疫损伤为主，呈急性发作、慢性肝炎或乙肝携带状态，此时可以通过对机体出现的血清学指标进行检测，看是否感染乙型肝炎[3]。HBsAg、HBsAb、HBeAg、HBeAb及 HBcAb俗称“两对半”。HBsAg主要为糖基化的病毒蛋白gp27，本身不具有传染性，它在急性自限性感染者血清中存在时间不超过6个月，是HBV感染后第一个出现的血清学标志物，是HBV感染的主要标志。HBeAg是HBV复制及具有强感染性的一个指标[4-6]。但有研究证实HBV的PreC区可发生突变，在PreC区出现终止密码子，使PreC基因不能与C基因共同转译出完整的HBeAg，故受染细胞常不能被HBeAb及相应的细胞免疫所识别而清除，因此对HBeAg阴性患者也应注意检测其血中的HBV-DNA，以全面了解病毒的复制情况[7-8]。上述统计数据中笔者发现HBV-DNA阳性患者中HBsAg阳性比例为92.3%，HBsAg阴性比例为7.7%，说明HBV-DNA阳性患者中HBsAg阳性占绝大多数，其中又以大、小三阳患者多见（占61.5%），但仍然有7.7%的HBV-DNA阳性患者的HBsAg阴性，说明HBsAg阴性并不能完全排除HBV感染，因为S基因发生变异导致HBsAg多肽氨基酸序列改变或低水平的表达可使常规检查方法难于检出，因此提示我们在实际工作中发现HBsAg阴性、HBcAb阳性且肝功能异常者需进一步做HBV-DNA检查[9]。检测HBV-DNA含量不仅能较好地反应乙肝病毒携带者的病毒血清水平和感染强弱程度，对动态观察治疗前后乙肝病毒含量变化以及