Treg联合imDC诱导大鼠肝移植免疫耐受的实验研究-外科学(普外)专业论文.docxVIP

福建医科大学 2008 级硕士研究生论文 PAGE PAGE 2 Treg联合imDC诱导大鼠肝移植免疫耐受的实验研究 摘 要 目 的 探讨受体大鼠脾脏来源的Treg联合供体大鼠骨髓来源的imDC诱导大鼠同种 异体原位肝移植免疫耐受的能力。 方 法 DA→Lewis 大鼠同种异体原位肝移植 100 例，分 5 组：急排组、mDC 组、imDC 组、Treg 组、imDC+ Treg 组（共输入组）；分别于移植前 5d 给 Lewis 大鼠尾静 脉注射 mDC、imDC、Treg、Treg+imDC 细胞（细胞数：mDC 2×106 个、imDC 2×106 个、Treg 1x107 个），于肝移植术后 3d、7d、10d 各处死 4 只，观察大鼠肝移植术 后外周血肝功能（ALT 和 TBIL）、血清细胞因子水平（IL-2、IL-10、TGF-β）、 移植肝急性排斥反应（RAI 评分）、移植肝汇管区淋巴细胞凋亡的改变，分析各 实验组大鼠生存时间。 结 果 肝功能检测表明：imDC 组、Treg 组和共输入组移植后 3d、7d、10d 的肝功 能优于急排组和 mDC 组，其中 Treg 与 imDC 共输入组肝移植大鼠术后 ALT 及 TBIL 升高程度低，恢复时间快。 ELISA 检测表明：肝移植术后 7d Treg 与 imDC 共输入组外周血 IL-10 浓度 高于急排组、mDC 组、Treg 组，但与 imDC 组相比差异无统计学意义（P0.05）； 其外周血 TGF-β浓度高于急排组、mDC 组、imDC 组，但与 Treg 组相比差异无统 计学意义（P0.05）；其外周血 IL-2 浓度低于急排组、mDC 组，但与 imDC 组和 Treg 组相比虽然浓度偏低，但无统计学差异（P0.05）。 急性排斥反应评分表明：Treg 与 imDC 共输入组大鼠肝移植术后仅有较少量 的单核细胞浸润，RAI 评分 1～5 分，属非确定型急性排斥反应到轻度急性排斥 反应，术后 10d 开始出现肝细胞再生，有少量的中性粒细胞浸润。mDC 组大鼠肝 移植术后 3 天就出现轻度急性排斥反应，7d 后出现重度排斥反应，较急排组出 现早，且程度重。而 Treg 组和 imDC 组大鼠肝移植术 7d 后才开始出现轻度排斥 反应，10d 后 Treg 组出现重度度排斥反应，imDC 组仅出现中度排斥反应。 TUNEL 染色表明：急排组和 mDC 组大鼠肝移植后肝脏组织汇管区仅有少量淋 巴细胞凋亡，imDC 组和 Treg 组肝脏组织汇管区淋巴细胞凋亡数量高于 mDC 组， 但低于共输入组,共输入组肝脏汇管区淋巴细胞凋亡数量最多。同时，在大鼠肝 移植术后 3d、7d、10d 中，mDC 组汇管区淋巴细胞凋亡逐渐消失，而共输入组的 汇管区淋巴细胞凋亡数量逐渐递增。 肝移植术后生存时间观察表明：共输入组出现较长存活时间的大鼠，中位生 存时间为 37 天，长于 imDC（23d）组和 Treg（15d）（P0.05）。Treg 组中位 生存时间与 imDC 组差异有统计学意义（P=0.003），imDC 组生存时间长于 Treg 组。 结 论 imDC、Treg 单独输入均未能诱导同种异体大鼠肝移植长期存活；Treg 联合 imDC 诱导同种异体大鼠肝移植免疫耐受的能力显著增强，可显著延长同种异体 肝移植大鼠的生存时间。 关键词 树突状细胞 调节性 T 细胞 免疫耐受 大鼠肝移植 急性排斥反应 The study on inducement of rat liver transplantation tolerance by Treg and imDCs cells ABSTRACT Objective To study the tolerance capability which induces rat allogeneic orthotopic liver transplantation and prolong the survival time of allograft that combines with imDCs and Tregs. Methods One hundred cases of rat allogeneic orthotopic liver transplantation were accomplished in the strain combination of DA to Lewis rats, which were divided into 5 groups, including acute rejection group, mDC group, imDC group , Treg group, co