THAP11在造血细胞分化中的作用研究-制药工程专业论文.docxVIP

摘 要 THAP11 是 THAP 蛋白家族的最新成员，前期研究表明 THAP11 是调控细胞 生长、胚胎形成和 ES 细胞多能性的一个转录因子，THAP11 通过下调 c-Myc 抑 制细胞增殖。c-Myc 是调控红系巨核系分化的关键转录因子，并且表达谱数据显 示 THAP11 在造血干细胞、多能祖细胞和人脐带血 CD34+CD38-细胞中高表达， 提示 THAP11 可能参与造血细胞分化，但目前对于 THAP11 在造血分化中的作 用尚未报道。 本论文对 THAP11 对造血细胞分化的影响进行了深入研究。首先，通过检测 THAP11 在人脐带血 CD34+细胞向红系和巨核系分化过程中的表达变化，发现 THAP11 在向红系分化中表达下调，而在巨核分化中表达上调，提示 THAP11 参 与红系/巨核系分化的调控。接着我们构建了 THAP11 过表达及 RNAi 的第三代 慢病毒载体，通过病毒包装获得慢病毒颗粒，建立了过表达和敲低 THAP11 的 K562 和 TF-1 细胞稳定株。采用 hemin 诱导 K562 细胞向红系分化模型，发现 THAP11 过表达可抑制红系分化，表现为抑制 GPA 和 HBA 的上调，联苯胺染色 阳性细胞比例降低，而敲低 THAP11 则促进红系分化。利用 EPO 诱导 TF-1 细胞 向红系分化的模型，得到相同的结果。采用 PMA 诱导 K562 细胞向巨核系分化， 发现 THAP11 过表达可促进巨核系标志物 CD61 的表达和多倍体形成，与之相反， 敲低 THAP11 则抑制了巨核分化。初步研究表明 THAP11 可上调 GATA-2 和 Fli1 基因，下调 c –Myc 和 c-Myb 基因的表达，提示 THAP11 对造血细胞分化的影响 可能是通过调控多种基因表达来进行的。另外，过表达 THAP11 明显抑制 CD34+ 细胞的增殖能力，而敲低 THAP11 促进 CD34+细胞的生长，提示 THAP11 可能 参与了 CD34+细胞的生长与增殖。 以上结果表明 THAP11 是一种新的造血细胞分化调控分子，可抑制红系分化， 促进巨核系分化。 关键词： THAP11；红系分化；巨核系分化；K562 细胞；TF-1 细胞；慢病毒 ABSTRACT THAP11 is the most recently described member of THAP proteins and previous studies suggested that THAP11 was a transcription factor involved in cell growth, embryogenesis and ES cell pluripotency. Our previous study suggested that THAP11 was a suppressor of c-Myc by binding directly to the promoter of c-Myc and repressing the transcription of c-Myc. Various studies suggested that c-Myc was a key transcription factor involved in erythroid-megakaryocytic fate decision. Furthermore, THAP11 is expressed highly in human hematopoietic stem cells, multipotent precursors and human umilical cord CD34+CD38- cells. However, no study has been reported about the roles of THAP11 in hematopoietic differentiation. In this study, we investigated the roles of THAP11 on hematopoietic differenatiation. First, the expression profiles of THAP11 during erythroid and megakaryocytic differentiation were deceted. We found that THAP11 was down-regulated during erythroid differentiation and increased during megakaryocytic differentiation. T