uPA合成抑制剂Amiloride对人宫颈癌细胞体外侵袭迁移及凋亡的影响-妇产科学(妇科肿瘤学)专业论文.docxVIP

PAGE PAGE 5 uPA 合成抑制剂 Amiloride 对人宫颈癌细胞体外侵袭 迁移及凋亡的影响 中文摘要 目的：探讨 uPA 合成抑制剂 Amiloride（阿米洛利）对人宫颈癌细胞体外侵 袭迁移及凋亡的影响及可能的机制。 方法：通过体外培养人宫颈癌细胞 Hela，采用逆转录聚合酶链反应（RT-PCR） 检测 Amiloride 对 Hela 细胞中 Matriptase、uPA、uPAR、MMP-2 mRNA 表达的 影响；采用细胞迁移划痕修复实验测定 Amiloride 对 Hela 细胞迁移能力的影响； 采用 millicell 小室人工重组基底膜侵袭实验检测 Amiloride 对 Hela 细胞侵袭能力 的影响；采用流式细胞分析技术检测 Amiloride 对 Hela 细胞凋亡的影响。 结果： 1．半定量 RT-PCR 结果显示人宫颈癌 Hela 细胞系高表达 Matriptase、uPA、 uPAR、MMP-2 mRNA。 2．半定量 RT-PCR 结果显示加入不同浓度的 Amiloride 作用 24 小时后， 50μmol/L Amiloride 即可明显下调 Hela 细胞 uPA、MMP-2 mRNA 的表达（P﹤ 0.05），并具有明显的浓度依赖性；不同浓度 Amiloride 对 Matriptase、uPAR mRNA 表达无明显影响（P＞0.05）；加入 150μmol/L Amiloride，作用不同时间后，与对 照组相比，2 小时后 Hela 细胞中 uPA mRNA 产量即明显下降（P＜0.01），而 4 小时后 MMP-2 mRNA 产量始下降（P＜0.05），并具有明显的时间依赖性。 3．细胞迁移划痕修复实验检测 50、100、150μmol/L Amiloride 作用后，Hela 细胞的 6、12、24h 迁移距离均明显小于对照组（F=56.893，360.000，360.038， 均 P＜0.01），细胞迁移能力与细胞中 uPA mRNA 表达水平呈正相关（r=0.942，P ＜0.01）。 4．Matrigel Millicell 小室检测 50、100、150μmol/L Amiloride 作用 24 小时 后，穿透人工基质膜的 Hela 细胞数较无 Amiloride 作用的对照组明显减少，并呈 浓度依赖性（F=226.95，P＜0.01），细胞侵袭力与细胞中 uPA mRNA 表达水平呈 正相关（r=0.969，P＜0.01）。 5．流式细胞分析技术检测 50、100、150μmol/L Amiloride 作用 24、48 小时 后， Hela 细胞的 24、48 早期凋亡率均明显高于对照组（F=59.895，472.428， 均 P＜0.01），细胞早期凋亡率与细胞中 uPA mRNA 表达水平呈负相关（r=﹣0.941， P＜0.01）。 结论： 1．低浓度的 uPA 合成抑制剂阿米洛利即可特异性抑制人宫颈癌 Hela 细胞系 uPA mRNA 表达，并进一步导致 uPA 系统下游因子 MMP-2 mRNA 表达的下降， 并具有浓度-时间依赖性；而不同浓度阿米洛利对 uPA 受体（uPAR）及 uPA 系统 上游调节因子 Matriptase 无明显抑制作用。 2.uPA 可能是与宫颈癌侵袭转移相关的基因，阿米洛利可通过下调 uPA mRNA 表达抑制人宫颈癌 Hela 细胞的体外侵袭转移能力。 3.uPA 可能是与细胞凋亡相关的基因，阿米洛利可通过下调 uPA mRNA 表达 诱导人宫颈癌 Hela 细胞凋亡的发生，提示值得进一步研究其抗肿瘤作用。 关键词 阿米洛利 宫颈癌 尿激酶型纤溶酶原激活剂 侵袭转移 细胞凋亡 Effect about the synthetic inhibitor of urokinase plasminogen activator on the invasion and metastasis and apoptosis of Human Cervical Cancer Cell in Vitro Abstract Objective: To investigate the effects of Amiloride which is the synthetic inhibitor of urokinase plasminogen activator on the invasion,metastasis and apoptosis of Human Cervical Cancer Cell in Vitro and its possible mechanism. Methods: Culture human cervical