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Tanaproget对兔动脉粥样硬化斑块MLCK表达的影响及机制-心血管内科专业论文
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学位论文作者: 日期: 年 月 日
摘
摘 要
Tanaproget 对兔动脉粥样硬化斑块 MLCK 表达的影响及机制
研究生:鲁艳娇 导 师:张彦周
郑州大学第一附属医院心内科 河南 郑州 450052
摘 要
背景
动脉粥样硬化(atherosclerosis, AS)是心血管系统中最常见的疾病之一。近 百年来,心血管系统疾病已成为 21 世纪全球首位死因,使世界疾病谱发生重大 变化。AS 属于失去弹性、动脉壁增厚的动脉硬化范畴,主要累及全身大、中型 动脉,其经历动脉内膜脂质沉积,纤维化和粥样斑块形成等过程,造成管壁增 厚变硬、管腔狭窄,在侧支循环不能代偿时,会使心、脑、肾等重要器官的血 流发生中断而引起缺血、纤维化或坏死,严重影响人类身体健康。AS 的发病机 制非常复杂,经过百余年的研究曾提出脂质浸润、氧化应激、炎症反应等多种 学说。但近来发现血管内皮细胞损伤也是 AS 发生的重要机制,有研究称,血 管内皮损伤是 AS 形成的始动环节。
肌球蛋白轻链激酶(myosin light chain kinase, MLCK)介导的 MLC 磷酸化在 内皮通透性变化中发挥重要作用。第 18 位丝氨酸和第 19 位苏氨酸被磷酸化的 MLC 可激活肌球蛋白重链头部 ATP 酶产生能量,进而使内皮细胞肌球蛋白 II 与肌动蛋白相互作用,引起细胞收缩使细胞间隙增大,内皮通透性增加。增大 的血管内皮通透性便于血液中的脂质成分渗透至内皮下,加速 AS 的形成。
丝裂原活化蛋白激酶(mitogen-activated protein kinases, MAPK)是一种丝/ 苏氨酸蛋白激酶,在许多信号传递途径中发挥重要作用。细胞间信号调节蛋白 激酶(extracellular regulated protein kinases, ERK)是 MAPK 家族中(包括 JNK, ERK 和 p38)主要的成员之一。有研究称,ERK 能够提高内皮细胞 MLCK 活
I
性和 MLC 磷酸化水平,造成细胞间连接破坏和间隙形成。又有研究称,MAPK
的作用可被孕酮抑制。
Tanaproget(TNPR)是一种新型非甾体类孕酮受体激动剂,可与多种生物体 的孕酮受体(progesterone receptor, PR)紧密结合。近年来性激素对心血管疾病的 保护作用已被广泛研究,但作为一种新型药物,TNPR 对心血管疾病,特别是 对 AS 的影响研究尚少。因此,本研究拟在建立 AS 兔模型的基础上,探讨 TNPR 是否能够通过 MAPK 途径影响 MLCK 表达及内皮通透性,发挥抗 AS 的作用。
目的
应用高胆固醇饮食加静脉注射牛血清白蛋白的方法建立新西兰兔 AS 模型; 探讨 TNPR 在 AS 模型兔中对 MLCK 表达及内皮通透性的影响;探讨 TNPR 对 AS 模型兔动脉内皮细胞 MLCK 表达的影响是否通过 MAPK 通路,为 AS 的治 疗提供新的靶点。
方法
1 建立 AS 模型兔:将 24 只普通级新西兰大白兔随机分为 3 组:正常组、 AS 模型组、TNPR 组。正常组给予普通饲料,AS 模型组给予高胆固醇饮食加 静脉注射牛血清白蛋白,TNPR 组在高胆固醇饮食加静脉注射牛血清白蛋白的 基础上,每日在饮食中加喂 TNPR(10 mg/kg/day),喂养 12 周后解剖取材;
2 主动脉大体标本的油红 O 染色观察主动脉粥样斑块形成情况;
3 主动脉冰冻切片免疫荧光法(大分子染料渗透法)分析动脉内膜通透性;
4 免疫组化法和 Western blot 法检测主动脉 MLCK 蛋白水平;qRT-PCR 检 测 MLCK 的 mRNA 水平;Western blot 检测 JNK、ERK 和 p38 的磷酸化水平。
结果
1 喂养 12 周后新西兰兔 AS
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