TIP30基因对喉癌肝癌耐药及EMT的作用研究-耳鼻咽喉头颈外科学专业论文.docx

TIP30 TIP30 基因对喉癌及肝癌耐药及 EMT 的作用研究 万方数据 万方数据 摘 要 研究背景 喉癌是头颈部最常见的恶性肿瘤之一，其发病率在我国约占全身肿瘤的 1%-2% ，占耳鼻咽喉恶性肿瘤的 11% ～22%，化疗是重要的治疗手段之一，近年来 根据 NCCN (National Comprehensive Cancer Network 美国国立综合癌症网络)制定的 标准化疗治疗方案未能明显提高其 5 年生存率，其重要因素之一就是肿瘤发生了耐药 性，最终导致了治疗的失败。肝癌是第三大肿瘤杀手，2000 年约有 548，600 人死于 肝癌，是我国最常见的恶性肿瘤之一，在我国肿瘤死因排名中位列第 2。虽然目前肝 癌早期的诊断率有所提高，但由于早期肝癌临床症状不明显，临床上发现时已至晚期， 且由于肝脏是全身血供及淋巴管最为丰富的脏器，肿瘤极易发生转移，这是肝癌预后 较差的主要原因之一。为提高上述两种肿瘤的临床治疗效果，有必要对其转移及耐药 的分子机制进行深入研究，为其诊断和治疗提供新靶点、新策略。 TIP30，又称 CC3，是 30kd 的转录辅助因子，最早发现于肺癌，是利用 RNA 差 异显示技术比较高转移性和低转移肿瘤的时发现的抑癌基因。在正常组织中 TIP30 均有一定的表达量，而在肿瘤组织中表达相对较低，如胰腺癌、恶性黑色素瘤、肺癌、 结肠癌及肝癌等肿瘤中 TIP30 表达均显著下调。因其有丝／苏氨酸激酶的活性，RNA 聚合酶Ⅱ最大亚基可以和 TIP30 结合并被其磷酸化 C 末端的七肽基序，在一定的微 环境下调节与细胞增殖、凋亡等相关基因的表达，与多种肿瘤的转移和预后密切相关。 过表达 TIP30 可抑制肿瘤血管生成、细胞外基质降解、降低细胞的侵袭和迁移能 力，此外 TIP30 还可与 ETS1 蛋白 N 端相互作用，调控骨桥蛋白转录，抑制其表达， 从而调控肝癌细胞的转移。新近研究表明 TIP30 可作为索菲拉尼及 microRNA-10b 的 靶基因，实现其对肿瘤细胞转移的调控。在肿瘤细胞中，TIP30 基因往往呈现高甲基 化状态，致使 TIP30 表达下降，最终导致肿瘤发生了侵袭和转移。此外，在肝癌细胞 中 TIP30 可以通过调控凋亡相关基因 BCL-2 的表达增加化疗效果，提高化疗药物氟 尿嘧啶对肿瘤的杀伤力，延长动物带瘤生存的时间。上述研究均提示 TIP30 在肿瘤细 胞中具有抑制肿瘤转移，提高化疗敏感性的作用，但是在喉癌中 TIP30 的具体作用仍 为见相关文献报道，且 TIP30 调控转移及耐药的具体作用机制仍然有待于我们进一步 深入的研究。 利用免疫组化技术，我们检测了 104 例喉癌病人的肿瘤及癌旁组织中 TIP30 的蛋 白表达情况，分析了多项临床指标与 TIP30 蛋白质表达的相关性，通过动物模型成功 获得了了喉癌耐药细胞株 DSCs，并在此基础上对 TIP30 调控喉癌及肝癌耐药及 EMT 的生物学功能进行了进一步研究。 - 1 - 研究方法及结果 第一部分 TIP30 在喉癌组织中的表达及与临床指标的关系 采用 Envision 法检测 TIP30 在 104 例喉癌及癌旁组织中表达情况，按照免疫组化 评分的标准，将组织中 TIP30 的表达分为两组：高表达和低表达组。TIP30 蛋白呈棕 黄色颗粒分在胞浆及胞核中均有着色，但以胞浆为主。在 104 例病人中，79 例中 TIP30 呈低表达，25 例病人呈高表达。利用分层分析法检验了 TIP30、性别、年龄、临床分 期、分化程度与患者预后的关系，结果显示 TIP30 的表达与喉癌病人的预后密切相关 （p＜0.001）。Kaplan–Meier 生存曲线分析 TIP30 蛋白表达量与喉癌患者总体生存 率的关系，发现 TIP30 的表达与喉癌患者预后关系密切相关，TIP30 高表达的患者生 存时间明显高于低表达患者。 第二部分 RNA-Seq 分析 TIP30 基因表达在头颈部鳞癌中与细胞化药耐药的关系以 及体内药物筛选喉癌耐药细胞株（DSCs）的功能鉴定及 TIP30 在 DSCs 中的表达 利用RNA-Seq高通量数据结合11株头颈部鳞状细胞癌化药敏感性的结果，分析 TIP30基因与头颈部鳞癌细胞化药耐药的关系。结果显示在11株头颈部鳞状细胞癌中 Hep2细胞及58F细胞TIP30呈高表达，其他几种细胞表达基本一致。耐药实验中TIP30 高表达的Hep2细胞及58F细胞化药耐药能力较其他细胞显著降低，提示TIP30基因的 表达可能与头颈部鳞状细胞癌的耐药密切相关。我们进一步采用顺铂体内给药的方法 获得喉癌耐药细胞株 DSCs 。通过 RT-PCR 检测了 DSCs 耐药基因 ABCG2, ABCC2,ABCB1的表达；体外耐药