TIP30通过OPN调控喉鳞状细胞癌增殖及转移的研究-耳鼻咽喉科学专业论文.docx

TIP30 TIP30 通过 OPN 调控喉鳞状细胞癌增殖及转移的研究 第二军医大学博士学位论文 第二军医大学博士学位论文 - - PAGE 11 - - - PAGE 10 - 摘 要 喉癌发病率在头颈部恶性肿瘤中占第二位，是较常见的恶性肿瘤之一。随着环境 污染，发病率有增高趋势。肿瘤术后局部复发和侵袭转移是死亡的主要原因，故寻找 高灵敏性，高特异性的肿瘤标记物，深入研究喉癌的侵袭、转移等机制，监测喉癌的 发生发展及预后，具有重要的临床应用价值。 TIP30 又称 CC3，是一种新发现的肿瘤抑制基因。近年来的研究表明，TIP30 在 多种正常组织中表达，在黑色素瘤、肺癌、恶性胶质细胞瘤、乳腺癌、结肠癌和肝细 胞癌等多种肿瘤中表达下调。研究 TIP30 抑制转移机制发现，TIP30 具有抑制肿瘤细 胞增殖和侵袭转移能力，促进肿瘤细胞凋亡，抑制肿瘤血管生成等作用。这种抑癌机 制可以通过 P53 的大量表达引起 Bad 和 Bax 等的大量表达，进而抑制致癌基因 Bcl-2/Bcl-Xl 蛋白水平的表达；TIP30 基因可通过下调人脐血管内皮细胞（HUVEC） 和血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor，VEGF)转录来导致肿瘤血管形 成减少，从而降低了肿瘤转移；TIP30 与抗癌药物联合应用可以产生叠加效应，加强 抑癌效果；另外，TIP30 蛋白可与 Karyopherin/ Importinβ 家族成员及核孔蛋白相结合， 抑制蛋白输入核内，也可能是抑癌的一个原因。最近有研究显示，肝癌中高表达 TIP30 通过与 ETSI 相互作用，抑制 ETS1 与 AP-1 对骨桥蛋白(oesteopontin, OPN)转录激活 的协同作用，从而降低 OPN 的表达，进而抑制肝癌的转移。而 OPN 是一种肿瘤转移 相关基因，可以加速细胞外基质降解和肿瘤血管形成，提高肿瘤细胞侵袭和转移能力。 在肝癌和肺癌研究中，已证实 TIP30 对肿瘤转移相关基因 OPN 的表达具有负性调控 作用。 但目前尚未见 TIP30 在喉鳞状细胞癌组织中的表达及其与临床病理学指标的相 关性报道，以及 TIP30 在喉癌中与 OPN 是否具有相关性和 TIP30 能否抑制喉恶性肿 瘤侵袭转移、降低 OPN、VEGF 和 MMP-9 等肿瘤转移相关基因的表达，其可能机制 也尚不清楚。因此本实验利用免疫组织化学，探讨喉癌组织中 TIP30 与 OPN 表达及 其相关性，以及 TIP30 表达水平对喉癌复发、转移和患者生存等的影响，评价 TIP30 作为喉癌预后指标的价值。并对 TIP30 的生物学功能在人类喉癌细胞系和裸鼠体内进 行了进一步验证，探讨 TIP30 抑制肿瘤侵袭转移的可能分子机制，以期为喉癌的早期 诊断、预后判定及治疗提供新的策略和理论依据。本研究共分为四个部分： 第一部分 TIP30 和 OPN 基因在喉癌组织中的表达及其临床意义。 目的：研 究人喉鳞状细胞癌（LSCC）组织中 TIP30 和 OPN 的表达，及其 TIP30 与临床病理 学特征、预后的关系，分析 TIP30 与 OPN、P53 表达的相关性。 方法：对 105 例喉 鳞状细胞癌及癌旁组织手术切除石蜡标本，采用免疫组织化学 SP,检测 TIP30 和 OPN 的表达并进行相关性分析；结合喉癌患者的临床病理学特征进行 TIP30 蛋白表达分 析；通过生存分析评价 TIP30 作为喉癌转移或预后指标的价值。 结果：TIP30 在喉 鳞癌组织中呈低水平的表达，和癌旁相对正常组织比较差异有统计学意义(P﹤0.01)。 TIP30 和 P53 的蛋白表达呈负相关(P=-0.249)，与 OPN 在蛋白水平上具有负相关性 (P=0.000)。TIP30 的表达与性别、年龄、原发部位无相关性，与临床分期、病理组织 学分级和颈部淋巴结转移有关。高分化及 I-II 期喉癌组织中 TIP30 的表达高，低分化 及 III-IV 期喉癌组织中其表达降低（P= 0.000 / P= 0.000），在淋巴结转移的喉癌组织 中 TIP30 蛋白表达明显高于无转移组( P=0.000)。TIP30 表达降低与患者的复发率呈 负相关（P= 0.000），与患者生存时间呈正相关（P=0.03）。结论：TIP30 的表达水平 和患者的存活时间密切相关，TIP30 可能在喉鳞癌发生发展和转移、复发中起到重要 的作用，可作为肿瘤标志物用于临床诊断和预后判断。 第二部分 TIP30抑制Hep-2细胞增殖和转移潜能的研究。 目的：体外观察TIP30 对喉癌Hep-2细胞增殖、迁移和侵袭转移的抑制作用。 方法：利用慢病毒载体将TIP30 导入Hep-2细胞或者干扰内源性TI