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流式细胞术检测草莓倍性方法优化 　　摘要 以草莓品种章姬、自育品种C1、二倍体野生种的叶片和根尖为试验材料，比较了2种提取液制备的细胞核悬浮液经流式细胞术检测的结果。结果表明：WPB提取液的效果较好，背景细胞碎片少，G0/G1峰清晰；叶片取材容易，杂质少，更适合作为试验材料。 　　关键词 草莓；流式细胞术；倍性 　　中图分类号 S668.4 文献标识码 A 文章编号 1007-5739（2015）20-0048-03 　　Method Optimization for Detection of Strawberry Ploidy by Flow Cytometry 　　WU Qing-qing 1 LAI Biao 2 ZHU Wen-chao 1 ZHONG Pei-lin 1 * 　　（1 Guizhou Province Horticulture Research Institute，Guiyang Guizhou 550006； 2 College of Horticulture，South China Agricultural University） 　　Abstract This paper took the strawberry variety――Zhangji，self-cultivated breed C1，leaf and root tips of diploid wild species as experimental materials to compare the detection result of nuclei suspensoid prepared from the two extracts by flow cytometry.The results showed that，WPB extract had a better effect and less background cell debris，a clearer G0/G1 peak；blade material was easy to get，with fewer impurities，and was more suitable to be the test material. 　　Key words strawberry；flow cytometry；ploidy 　　流式细胞技术具有突出的技术优势，快速、简单、检测数量大，被广泛用于基础研究。特别是随着荧光标记技术的不断开发，其在生物相关领域的应用越来越深入，大大延伸了对于细胞的观测能力[1-2]。流式细胞仪经常被用于鉴定植物的倍性，通过检测叶片等部位的细胞G0/G1期的核酸含量，即可知道植株倍性。 　　草莓（2n=14）属于蔷薇科草莓属，主要分布在亚洲、欧洲和美洲，是重要的经济作物。当前主流的草莓品种很多是八倍体，染色体较多且长度短，难以鉴定倍性。 　　利用流式细胞仪检测植物倍性是简单有效的办法，近年来逐渐被应用于草莓，这方面的相关报道也逐渐增多[3-4]。本试验借鉴了同行的经验并进行了简化，不需要经过样品的离心提纯，操作简便、快速，结果准确可靠，重复性好。 　　1 材料与方法 　　1.1 试验材料 　　供试材料为八倍体草莓品种章姬、自育五倍体品种C1、野生种二倍体A2，采集草莓的嫩叶、根尖作为试验材料，清洗干净后备用[5]。流式细胞仪为Partec公司生产CyFlow Space，染色液为Partec公司生产的CyStain UV Ploidy DAPI Staining Solution。 　　1.2 试验方法 　　首先是细胞核悬浮液的制备[6-8]，采用2种细胞核提取液做对比试验，如表1所示。 　　1.2.1 根尖细胞核悬浮液制备方法。取白嫩根尖5～6根，长度在1 cm左右，置于6 cm玻璃培养皿中，滴加400 μL细胞核提取液浸没样品，用锋利刀片切段，保证每一刀都彻底切断，切10刀左右，保证将根尖切为较短的片段，但不要切为糊状，加入2 mL染色液染色后，30 μm筛网过滤，上机测定[4-5]。 　　1.2.2 叶片细胞核悬浮液制备方法。取0.5 cm×0.5 cm大小鲜嫩叶片，滴加400 μL细胞核提取液浸没样品，用锋利刀片切割叶片，保证每一刀都彻底切断，切10刀左右，保证将叶片切为较小的碎片，但不要切为糊状，加入2 mL染色液染色后，30 μm筛网过滤，上机测定[6]。 　　2 结果与分析 　　2.1 2种细胞核提取液效果的比较 　　使用五倍体和八倍体的叶片作为材料，分别用2种细胞核提取液制备悬浮液，上机测定，比较图像效果。从图1、2可以看出，使用Partec提供的提取液效果并不好，背景噪音较大，掩盖了真实的信号，只能看到趋向