不同启动子驱动DR1172转基因 甘蓝型油菜的抗旱性研究-生物学专业论文.docxVIP

万 万方数据 独创性声明 本人声明所呈交的论文是我个人在导师指导下独立进行的研究工作及取得的研究 成果。尽我所知，除了文中特别加以标注和致谢的地方外，论文中不包含其他人 已经发表或撰写过的研究成果，也不包含为获得西南科技大学或其它教育机构的 学位或证书而使用过的材料。与我一同工作的同志对本研究所做的任何贡献均己 在论文中作了明确的说明并表示了谢意。 签名: 呐 日期: /f?1/. f..J 关于论文使用和授权的说明 本人完全了解西南科技大学有关保留、使用学位论文的规定，即:学校有权保留 学位论文的复印件，允许该论文被查阅和借阅:学校可以公布该论文的全部或部 分内容，可以采用影印、缩印或其他复制手段保存论文。 (保密的学位论文在解密后应遵守此规定) 签名:号冽药 导师签名: l句辈学术 日期: üJ) t.t.J 第 I 第 I页 西南科技大学硕士研究生学位论文 摘 要 干旱是植物生长发育过程中影响最大的非生物胁迫因素之一，它严重制约了 全球农业的发展。目前，对植物的抗旱机理，以及培育具有抗旱的转基因新品种 成为研究的热点。甘蓝型油菜，属于十字花科芸薹属，是植物蛋白和植物油主要 来源之一。在我国，因干旱导致油菜年产量损失达 20%以上。近来，利用基因工 程技术，通过转入外源过表达基因来提高油菜的抗逆能力已经取得一定的成效， 而增加的油菜抗逆功能的同时，又不影响油菜的品质和产量也受到了更多的关注。 本实验，分别构建 CaMV35S 和 AtPUB19 启动子驱动的 DR1172 基因的植物 表达载体，利用农杆菌介导法转入甘蓝型油菜中，从而研究不同启动子对转 DR1172 基因甘蓝型油菜的抗旱性能力的影响，以及对转基因油菜生理生化造成的 差异，最终筛选出综合性状良好的油菜新品种。 目前，取得的成果如下： （1）分别构建了植物表达载体 pCambia-AtPUB19::DR1172 和 PBI121-CaMV35S::DR1172，并成功转化 EHA105 感受态细胞。 （2）通过使用分析软件，发现 AtPUB19 启动子顺式作用元件上含有与干旱、 脱水相关应答的元件、启动子和增强子的保守元件、启动子的核心保守序列，以 及预测的两个转录起始点。 （3）利用农杆菌介导法分别将 EHA105 中的植物表达载体转入甘蓝型油菜中， 通过 PCR 检测，发现含有 pCambia-AtPUB19::DR1172 的转基因植物 78 株和含有 PBI121-CaMV35S::DR1172 的转基因植物 46 株。 （4）采用 PEG6000 模拟干旱实验处理的方法，分别对 T1 代种子（非转基、 转 AtPUB19::DR1172、转 CaMV35S::DR1172）进行不同 PEG 浓度的胁迫处理实验， 以及 20%PEG 浓度下不同时间的胁迫处理实验。结果显示，在不同干旱情况下， CaMV35S 和 AtPUB19 启动子都可有效的驱动 DR1172 基因的表达，但高度干旱胁 迫时，与 CaMV35S 启动子相比较，AtPUB19 启动子可更高效的驱动 DR1172 基因 的表达，且显著提高油菜叶片的抗氧化酶活性。在不同时间的干旱胁迫后，转 CaMV35S::DR1172 基因组和转 AtPUB19::DR1172 基因组油菜叶片的抗氧化酶活性 呈现上升趋势，而非转基因组呈先上升再下降的趋势。同时，CaMV35S 启动子和 第 I 第 II页 西南科技大学硕士研究生学位论文 AtPUB19 启动子可驱动 DR1172 基因可缓解 MDA 对植物组织造成的伤害。 AtPUB19 启动子驱动的 DR1172 基因也减缓了叶绿素含量、相对含水量的降低速 率，相对电导率的增加速率，以及提高了脯氨酸含量和可溶性糖含量，降低了干 旱对植物造成的损失程度。 （5）实时荧光定量 PCR 结果表明，随着干旱胁迫时间的持续性增加，CaMV35S 启动子驱动 DR1172 基因在油菜叶片中的相对表达量维持在一个较低的水平，而 AtPUB19 启动子驱动的 DR1172 基因组在油菜叶片中的相对表达量随着干旱时间 的增加而呈现较高的水平。 （6）根据 20%PEG 处理不同时期的油菜叶片，其形态特征变化显示，高度干 旱胁迫可提高 AtPUB19 启动子驱动 DR1172 基因的抗旱水平，且高于 CaMV35S 启动能力。说明了 CaMV35S 驱动的基因在油菜表达中不具有时间特异性和组织特 异性，而 AtPUB19 可根据植物不同的发育阶段和生长环境，对外源基因的表达进 行定时、定点、定量的诱导表达，从而缓解干旱对其形状和品质的不良影响。 关键词：AtPUB19；CaMV35S；DR1172；甘蓝型油菜；干旱 西南科技大学硕士研究生学位论文第 西南科技大学硕士研