猪细小病毒wh1株疫苗病毒增殖培养条件优化研究-study on optimization of proliferation and culture conditions of porcine parvovirus wh1 vaccine virus.docxVIP

州州州，，州川川a 州州州，， 州川川a川u mmmw 喇喇喇nυ 川呻唰nu m川川肉 。 丁A ， 阳 Y 本研究用猪细小病毒 WH斗株试制疫菌，在遵循《猪细小病毒 (WH-l 株)灭 活疫苗生产与检验规程》的前提下，通过对…系列影响病毒效价的因素进行优化， 最终确定了最优的病毒增殖培养条件。 不同细胞系对病毒效价的影响:用 IBRS♂细胞与PK-15 细胞分别接毒，结 果表明猪细小病毒 WH-l 株在 IBRS♂与PK15 细胞上生长增殖收获的病毒效价 没有显著差异 (P0.05) 。猪细小病毒WH-1 株适合在 IBRS-2 与 PK-15 细胞上 生长增殖，但 IBRS♂宽容易传代，所以选择其进行下一步试验。 不同培养方法对病毒效价的影响:用静置培养的 IBRS-2 扁瓶细胞 4 瓶和旋 转培养的转瓶细胞 4 瓶分别接毒，结果表明扁瓶静置培养方法收获的病毒效价显 著高于转瓶旋转培界方法 (P0.05) 。但是从生产角度上说，转瓶旋转培养更适 用，因此选择转瓶旋转培养进行下一步试验。 不同体积培养液对病毒效价的影响:用 IBRS-2 细胞接种猪细小病毒 WH-1 株，各试验组加入培养液体积分别为 1000m1/瓶、 1200时/瓶、 1500时/瓶。结果 表明每瓶加入 1000ml 培养液收获的病毒液效价最低，显著低于 1200ml 和 150伽d (P0.05) ，而每瓶加入1200ml 和 1500ml 培养液收获的病毒液效价没有显著笼 异 (P0.05) 。但是从生产实践来看，每瓶加入 1500ml 的产量更高，能够提高 生产效能。 培养液中不间血清浓度对病毒液效价影响:用 IBRS-2 细胞接种猪细小病毒 WH-1 株，各试验组加入培养液的血清浓度分别加入 8%、10%、12%。结果表明 培养液的血清浓度为 8%收获的病毒液效价显著低于 10%和 12%收获的病毒液 (P 0.05) ，但10%和 12%两者收获的病毒液效价无显著差异 (P0.05) 。从节约 生产成本和提高疫苗品质的角度来说，应该选择 10%。 不同生长时间的细胞对病毒效价的影响:分别选取生长 24h、48h、72h 的IBRS 细胞接毒，结果表明生长时间为 24h 的细胞所产病毒效价显著低于生长时间为 72h 的细胞 (PO.O日，而生长时间为 72h 的细胞病毒效价显著低于生长时间为 48h 的细胞 (P0.05)o 由此可见，选择生长时间为 4铀的细胞进行接毒，可以 获得效价最高的病毒液。 病毒液的免疫原性测定:在试验生产的病毒液中，选择效价达到规程标准要 求( 105.5TCIDso!ml )的病毒液 6 批，并分为效价较低组和效价较高组，两者病 毒效价差异显著 (PO.OS) 。将上述挑选的病毒液分别进行灭活、配苗和乳化， 分别用豚鼠和猪进行免疫原性测定。用豚鼠进行的免疫原性检验结果表明效价较 低组和效价较高组试制成疫苗后，免疫原性没有显著差异 (PO.OS) ，都完全可 达到该疫苗的标准要求:用猪进行的免疫原性检验结果也可得出一致结论。 关键词:猪细小病毒; WH-l 株:培养条件:优化 ω. Optimization of the conditions for porcine parvovirus( Wlι1 strain) culture Li Jie((Preventive Veterinary Medicine)) Directed by Yan Qigui and Yu Ruo-fei Abstract ηlís paper was about 也e trial production of vaccine against porcine p町vovirus (WH斗耐ain). Basic on Procedure 岛r Preparation and Test of Inactived Vaccine Against Porcine Parvovirus (W旧Strain)，a series of factors which influence 也e viral titer had been studied. The optirnal conditions for virus culture wωdetermined. Detennination of ce111ines: A comparative study on the different susceptibility of IBRS-2 cells and PK-15 cells 阳也e PPV was conducted. No si伊ificant di岱rences of viral titer