异氟烷对新生小鼠神经元细胞外信号调节激酶和cAMP反应元件结合蛋白磷酸化水平影响.docVIP

异氟烷对新生小鼠神经元细胞外信号调节激酶和cAMP反应元件结合蛋白磷酸化水平影响 　　[摘要] 目的 观察异氟烷对小鼠神经元细胞外信号调节激酶和环磷酸腺苷（cAMP）反应元件结合蛋白磷酸化水平的影响，探究异氟烷诱导神经元损伤和学习记忆障碍的可能机制。 方法 原代培养小鼠神经元，分为对照组、0.96 mmol/L异氟烷处理12 h及24 h组。采用MTS方法检测各组细胞活力；Western blot方法检测p-ERK1/2和p-CREB表达情况；逆转录定量PCR（RT-qPCR）方法检测ERK和CREB mRNA表达。 结果 与对照组比较，0.96 mmol/L异氟烷处理12 h及24 h后神经元活力明显下降（P 0.05）。 结论 一定浓度的异氟烷可以降低原代培养的小鼠神经元活力和ERK1/2、CREB的磷酸化水平。 　　[关键词] 异氟烷；神经元；细胞外信号调节激酶；cAMP反应元件结合蛋白 　　[中图分类号] R614.2 [文献标识码] A [文章编号] 1673-7210（2016）09（b）-0022-04 　　[Abstract] Objective To investigate Isoflurane-induced neuronal damage and possible mechanisms involved in learning and memory impairments. Methods Cerebral neurons separated from fetal mice were cultured and divided into three groups， one control group， two experimental groups were treated with 0.96 mmol/L Isoflurane for 12 h and 24 h， respectively. MTS method was used to determine the cell viability； Western blot method was used to detect p-ERK1/2 and p-CREB expressions； the reverse transcription qPCR （RT-qPCR） method was used to detect mRNA expressions of ERK and CREB. Results Compared with the control group， the viability of neuronal cells decreased significantly （P 0.05）. Conclusion A certain concentration of Isoflurane may directly inhibit neuronal cell viability and also inhibits the activities of ERK1/2 and CREB. 　　[Key words] Isoflurane； Neuron； ERKs； CREB 　　全麻药异氟烷因其价格便宜、毒副作用小、诱导快，是临床中应用广泛的吸入麻醉药之一。近年来研究表明，异氟烷急性暴露可诱发神经细胞凋亡，引起新生大鼠长期学习记忆能力下降[1-2]；异氟烷还可以引发围术期成年患者术后认知功能障碍（Post-operative cognitive dysfunction，POCD）并对神经系统发育、学习及记忆产生影响[3]。细胞外信号调节激酶（Extracellular signal regulated kinases，ERKs）是丝裂原活化蛋白激酶家族成员之一，介导细胞增殖、分化及存活。在中枢神经系统中，ERK可影响神经细胞增殖分化、突触可塑性、轴突生长等，与脑内长时程增强（Long-term potentiation，LTP）的形成以及学习记忆功能密切相关[4-5]。研究证明，许多形式的突触可塑性都需要ERK参与，同时动物实验证明，抑制神经细胞中ERK活性可导致动物学习功能的降低[6]。 　　环磷酸腺苷反应元件结合蛋白（cAMP response element binding protein，CREB）在突触可塑性中具有重要的作用，激活CREB可促进多种与突触可塑性相关的转录因子的转录[7]，从而诱导产生一些与学习记忆十分相关的蛋白分子。 　　本实验采用神经细胞原代培养的方法，从细胞水平观察异氟烷对神经元ERK和CREB的影响，探讨异氟烷的神经毒性以及影响学习记忆能力的潜在机制。 　　1 对象与方法 　　1.1 主要材料