不同海拔慢性阻塞性肺疾病大鼠模型支气管肺泡灌洗液中细胞分类和TNF-α、IL-6、IL-10的水平变化-内科学(呼吸科)专业论文.docxVIP

青海大 青海大学 2010 级在职攻读临床医学硕士学位研究生毕业论文 第 第 PAGE 5 页 共 39 页 Keywords：Hypoxia,Altitude;Chronic obstructive pulmonary disease, Tumor necrosis factor alpha;Interleukin 6，Interleukin 10 前言 慢性阻塞性肺疾病(Chronic Obsructive Pulmonary Disease,COPD)是严重 危害人类健康的常见病。2002年WHO的世界卫生报告指出COPD是目前世界上第五 大致死性疾病,仅次于心脏病,中风,下呼吸道感染及艾滋病[1]?主要发病机制包 括凋亡[2,3]?蛋白酶/抗蛋白酶失衡[4]?慢性炎症[5]和氧化应激[6]等? COPD是以气道、肺实质和肺血管的慢性炎症为特征，在肺的不同部位有肺泡 巨噬细胞、T淋巴细胞(尤其是CD产细胞)和中性粒细胞增加。激活的炎症细胞释 放多种介质，包括白三烯-B4(LTB4)、白细胞介素8(IL-8)、白细胞介素6(IL一6)、 肿瘤坏死因子α(TNF-α)等，它们能破坏肺的结构和(或)促进中性粒细胞炎症反 应[1] 。气道炎症尤其是小气道炎症是其主要病变特征，在其发病机制中起着十 分关键的作用。 高原环境具有低压、缺氧、寒冷、干燥、紫外线强、冬季长等特点，呼吸系 统与外界相通，高原环境的这些变化均会呼吸系统造成影响，高原呼吸系统疾病 可能具有与平原不同的特点。 有研究显示慢性缺氧环境下发生缺氧性肺动脉高压的大鼠的肺组织的形态 也发生变化。汪盛贤等[7]观察到在模拟海拔 5000m 条件下 30 天发生肺动脉高压 的大鼠除肺血管的结构发生改变外，肺组织的结构也出现了以肺泡灶性萎缩，肺 泡间隔增厚，肺组织面积密度增加为特点的改变。李飞等[8]观察证实大鼠在模拟 海拔 5000m 缺氧环、境下饲养，达到 30 天时，肺泡上皮细胞出现膜损伤及断裂。 Truog 等[9]观察新生大鼠在吸氧浓度 12%（相当于海拔）14 天时肺组织的变化时 发现，缺氧大鼠湿肺的重量只有常氧大鼠的 32%，肺泡数目减少，肺泡间隔增厚。 目前关于长期居住于高原的 COPD 患者的生存状况的研究资料十分有限。高 原寒冷、干燥，高原居民罹患慢性支气管炎的机会高于平原，并且由于高原空气 稀薄，血氧分压低于平原人，所以与平原相比肺功能分级相同的 COPD 患者的 PaO2 更低，COPD 患者更易出现较严重的缺氧血症和呼吸衰竭[10]。有研究显示[11]，海 拔每升高 95m，COPD 的死亡率增加 1/105，与海平面相比，这些病人死亡年龄较 轻且得病后存活的时间短于海平面。但也有与此意见相反的研究，如墨西哥的一 项研究显示[12-13]COPD 患者的死亡率并未因海拔升高而增加。 高原缺氧对 COPD 的影响究竟如何？在高原缺氧时 COPD 的气道炎症发生了怎 样的变化？目前国内外尚未发现有研究涉及。 为了回答这些问题，我们采用腹腔内注射香烟提取物(cigarette smoke extracts，CSE)方法建立不同海拔 COPD 大鼠模型,研究支气管肺泡灌洗液 (Broncho alveolar lavagefluid,BALF)中细胞分类和细胞因子肿瘤坏死因子α （TNF-α）、白细胞介素 6（IL-6）及白细胞介素 10（IL-10）的水平变化，旨在 探讨高原缺氧对 COPD 气道炎症的影响。 材料与方法 1.试剂与仪器 1.1 试剂 大鼠 TNF-α ELISA 试剂盒（武汉优尔生科技股份有限公司） 大鼠 IL-6 ELISA 试剂盒（武汉优尔生科技股份有限公司） 大鼠 IL-10 ELISA 试剂盒（上海森雄科技实业有限公司） PBS 缓冲液（北京中杉金桥生物技术有限公司） 万宝路香烟（焦油量 8mg，烟碱量 0.8mg）（福建的龙岩卷烟厂代理生产） 1.2 仪器 -20℃冰箱（中国海尔） 4C°冰箱（德国西门子） Eppendorf 移液器（100μL、200μL、1000μL） 一次性移液器枪头（100μL、200μL、1000μL） 离心管（0.5ml） ELX800 通用酶标仪（美国 BioTek 公司） 一次性三通管（墨西哥） 一次性注射针管若干（1ml、5ml、10ml、30ml、50ml） 500ml 灭菌用水空瓶若干 2.研究对象及分组、模型的建立 2.1 研究对象 清洁级雄性 SD 大鼠 50 只（兰州大学动物实验室购得），平均体重在 130~150g, 鼠龄 6 周，购买当日运回青海西宁。 2.2 分组 将 50 只大鼠随机分为对照组、中海拔盐水组、中海拔 COPD 组、高海拔盐水 组、高海拔 COPD 组，