巨峰葡萄组培快繁过程中初代培养基筛选.docVIP

巨峰葡萄组培快繁过程中初代培养基筛选 　　摘要:本试验以巨峰葡萄的带芽茎段为外植体,以MS为基本培养基,分析不同浓度的6-BA、NAA对芽分化的影响,探索巨峰葡萄最适合的培养基和培养条件,进行最佳激素浓度的对比,筛选出最佳的初代培养基配方。试验结果表明:在添加6-BA 2 mg/L和NAA 0.2 mg/L的MS培养基上初代培养后,启动率最高,达71.1%,MS+6-BA 2 mg/L+NAA 0.2 mg/L为最佳的初代培养基配方。 　　关键词:巨峰葡萄;培养基;初代培养 　　 　　葡萄是多年生藤本浆果果树,属于葡萄科葡萄属植物,栽培遍及五大洲,世界上栽培面积达1000万hm2,占世界水果产量30%以上,仅次于柑桔,位居第二[1]。巨峰葡萄原产日本,属欧美四倍体杂交种,生长势强,果穗大,果粒大,抗病性强,是当前我国栽培面积最大的鲜食葡萄品种,也是一个优良的鲜食品种。巨峰葡萄的栽培技术已经很成熟,扦插成活率也很高,但长期以来,由于缺乏严格的良种繁育制度和科学的管理方法,利用传统的扦插繁殖使得苗木老化,生理年龄增大,生长势减弱,甚至体内病毒积累越来越多[2-8],难以继续保持母本的优良性状,品种退化现象较为普遍,严重影响了“巨峰”葡萄的市场竞争力,给生产发展带来极大不利。通过组织培养途径中脱分化、愈伤组织的形成和分化过程可以使葡萄苗幼态化,因此通过这一途径可以将优良的葡萄单株复壮,获得脱毒苗[9-10]。组织培养能解决巨峰葡萄的脱毒问题,以恢复其优良种性,可为巨峰葡萄种质资源的保存和品种改良奠定基础。 　　1 材料与方法 　　以生长健壮、洁净且无病的巨峰葡萄新生枝条嫩梢作为材料,去除幼叶,将外植体切割成2.0~5.0 cm的带芽茎段,用1%洗衣粉水漂洗10 min,漂洗2次,用自来水冲洗干净,然后再用自来水冲洗2 h,滤干水,于超净工作台上、无菌条件下用0.1%升汞溶液进行浸泡,摇动消毒6 min,最后用无菌水冲洗4~5次。将已消毒好的茎段从原切口处剪掉,使之露出新切口,同时剪切成1.0~2.0cm长的小段,每一小段都带有1个茎节,这样有利于侧芽长出。将切出的小段,于芽朝上接入附加不同浓度的6-BA(0.5 mg/L、1.0 mg/L、2.0 mg/L、3.0 mg/L)和NAA(0.1 mg/L、0.2 mg/L、0.3 mg/L、0.4 mg/L)的MS启动培养基上进行初代培养,MS中添加琼脂7 g/L、蔗糖30 g/L,pH值 5.8~6.0。本试验设置16个处理,每个处理接种30个外植体,重复3次。外植体以插入培养基刚稳为宜,每瓶接种1个外植体,迅速系好试管,移至培养室内培养。培养条件为:温度24~28 ℃,光照强度1500~2000 Lx,光照时间每天12 h[11-13]。数据采用Excel 2003和SPSS 16.0进行统计分析。 　　2 结果与分析 　　2.1不同生长调节剂浓度对外植体启动率的影响 　　大部分外植体接种8 d后,基部开始膨大,随后逐渐形成黄白色颗粒状愈伤组织,30d后,统计启动率。由图1可知,处理6(6-BA 2.0 mg/L,NAA 0.2 mg/L)启动率最高,达到71.1%,与处理10(6-BA 2.0 mg/L,NAA 0.3 mg/L)差异不显著,但显著高于其他各处理组合。 　　2.1.1不同6-BA浓度对外植体启动率的影响。由图2(A)可知,6-BA浓度对外植体启动率的影响呈现出一定的规律性,随着6-BA浓度(0.5~3.0 mg/L)的升高,启动率呈先上升后下降的倒“V”型变化;在6-BA 2.0 mg/L时,外植体的启动率达到最高。经方差分析,各6-BA浓度下的外植体启动率差异显著。 　　2.1.2不同NAA浓度对外植体启动率的影响。由图2(B)可知,随着NAA浓度(0.1~0.4 mg/L)的升高,启动率呈先上升后下降的趋势,NAA 为0.2 mg/L时,外植体的启动率达到最大,这与6-BA下外植体启动率所呈现的规律相似。但经方差分析发现,不同NAA浓度下外植体的启动率差异不显著。因此,添加6-BA 2.0 mg/L和NAA 0.2 mg/L的MS培养基,对外植体的启动效果最好。 　　2.2 不同生长调节剂浓度对外植体叶片数的影响 　　由图3可知,各处理外植体的叶片数存在一定的差异,其中处理5(6-BA 3.0 mg/L,NAA 0.2 mg/L)的叶片数最多,平均有8.5片;处理4(6-BA 0.5 mg/L,NAA 0.1 mg/L)的叶片数最少,平均只有3.5片。经方差分析发现,处理5与处理6、处理9(6-BA 3.0 mg/L,NAA 0.3 mg/L)、处理13(6-BA 3.0 mg/L,NAA 0.4 mg/L)以及处理1(6-BA 3