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微波辅助提取绞股蓝中黄酮工艺研究 　　摘要：为了合理利用绞股蓝资源，对采摘末期绞股蓝中的黄酮进行微波辅助提取，选择微波功率、微波温度、微波时间、料液比、乙醇体积分数为影响因子，在单因素实验的基础上，通过正交实验优化了提取工艺，结果显示，微波功率300W，微波时间10min，微波温度70℃，料液比1：25g/mL，乙醇体积分数30%。此条件下黄酮的平均得率为4.898mg/g。采摘末期的绞股蓝中富含植物黄酮。可将这部分资源合理利用在饲料工业中来发挥重要作用。 　　关键字：微波辅助；提取；绞股蓝；黄酮；优化 　　前言 　　绞股蓝为葫芦绞股蓝属多年生草质藤本植物，又叫七叶草，因为生命力旺盛，容易栽培而俗称遍地生根。绞股蓝主要分布在陕西、四川、云南、湖南、湖北等地。秦巴山区盛产绞股蓝，出口国外，因此被誉为“绞谷”。绞股蓝具有很高的药用价值。富含皂苷、氨基酸、微量元素、黄酮、萜类、有机酸、生物碱、多糖、蛋白质等。其中的活性成分黄酮与动物的内分泌、脂质代谢及抗氧化有着密切的关系，在促进动物生产性能及提高免疫力等方面起着重要作用。黄酮是植物的次级代谢产物，含量会随植物生长发生变化，为了合理利用采摘末期的绞股蓝资源，实验采用微波辅助提取技术分别对4～11月份的绞股蓝中的黄酮进行提取并比较得率，重点对采摘末期11月份的绞股蓝中的黄酮提取工艺进行优化研究，以期为其在饲料工业中的合理应用提供理论参考。 　　1实验 　　1.1实验材料及仪器 　　绞股蓝购于陕西平利农贸市场，清洗除杂后干燥粉碎，过60目筛于阴凉干燥处放置备用：芦丁标准品（中国药品生物制品检验所，纯度≥99%）；乙醇、亚硝酸钠、硝酸铝、氢氧化钠等均为分析纯。 　　GR-200电子天平：日本AND；TU-1810紫外-可见分光光度计：北京普析通用仪器有限公司；SHZ-D（Ⅲ）循环水式真空泵：巩义市予华仪器有限公司；pHS-3TC（0.01级）精密酸度计：上海天达仪器有限公司：电热鼓风干燥箱101型：北京科伟永兴仪器有限公司：DHG-9075A型电热鼓风干燥箱：上海一恒科技有限公司：WF-2000微波快速反应系统：上海屹尧分析仪器有限公司：80-1型离心机：江苏金坛正基仪器有限公司：FW117中草药粉碎机：天津泰斯特仪器有限公司。 　　1.2??验 　　1.2.1芦丁标准曲线的绘制 　　精确量取0.5g的芦丁标准样品，用体积分数为30%的乙醇溶解后转入500mL的容量瓶中，配制1mg/mL的黄酮溶液，精密移取1mL放入100mL的容量瓶中用体积分数为30%的乙醇定容，配制10μg/mL的黄酮标准液。分别精密移取0，1，2，3，4，5，6mL放入7个50mL的容量瓶中，各加入1.0mL浓度为50g/L的NaNO2溶液混匀，放置6min后加入1.0mL浓度为100g/L的Al（NO3）3溶液混匀，放置6min。再加入10.0mL浓度为40g/L的NaOH溶液，最后用30%乙醇定容至刻度，再放置15min后于510.00nm波长处测其吸光度，并以其为纵坐标。黄酮待测液浓度为横坐标绘制标准曲线，得回归方程为：y=0.1206x-0.0208，R2=0.9972，说明黄酮浓度在0～10μg/mL范围内线性关系良好。 　　1.2.2绞股蓝中黄酮的提取 　　将备用的绞股蓝粉末和乙醇水溶液按照一定的料液比配制好后移入微波反应系统，设定微波功率、微波时间、微波温度、料液比、乙醇体积分数进行微波提取。提取后所得的混合液经过抽滤、离心得到上清液，按照1.2.1的方法测定吸光度。计算绞股蓝中黄酮的得率。 　　1.2.3黄酮得率的计算 　　黄酮得率/（mg/g）=[（y+0.0208）v/0.1206]/m 　　式中：y―待测液吸光度；v―测定液的体积（mL）；m―每次提取时所用绞股蓝质量： 　　1.3正交实验设计 　　选择微波功率、微波时间、微波温度、料液比、乙醇体积分数五个因素为正交实验的考察因子，以绞股蓝中黄酮得率为指标，采用五因素四水平的正交实验设计优化绞股蓝中黄酮的提取，实验安排见表1。 　　2实验结果及讨论 　　2.1不同月份绞股蓝中黄酮的提取效果比较 　　采摘末期的绞股蓝当作茶叶去加工经济价值较低，为了合理利用采摘末期的绞股蓝资源，实验探究了不同月份的绞股蓝中黄酮得率的变化，分别设定设定微波功率300W，料液比1：20g/mL，微波温度60℃，微波时间8min，乙醇体积分数30%进行微波提取，结果如图1所示。 　　由图1可知，随着月份的变化，绞股蓝中黄酮的微波提取得率也有很大差异，其中六月份的绞股蓝中黄酮的得率最高。4～6月份大部分的绞股蓝开始大量采摘，其中的黄酮含量也随采摘月份增大。6月份的绞股蓝中的黄酮含量最高。之后。绞股蓝中黄酮含量逐渐减小。11月份属