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微波辅助提取款冬花多糖工艺及抗氧化活性研究 　　【摘要】 目的：研究款冬花多糖微波辅助提取工艺及其抗氧化活性。方法：通过单因素实验，对影响款冬花多糖提取率的料液比、微波功率、微波时间进行考察，最后，选用正交实验对提取工艺参数进行优化，并研究款冬花多糖对羟基自由基、超氧阴离子的清除作用。结果：实验结果表明，款冬花多糖微波辅助提取最佳实验条件为料液比为1∶30（g/mL），微波功率为600 W，微波时间为7 min，在此条件下，多糖得率为14.806%。随着款冬花多糖浓度的增大，其清除羟基自由基、超氧阴离子的能力也随之增加。结论：款冬花多糖具有一定的抗氧化性，并对羟自由基、超氧自由基有较强的清除能力。 　　【关键词】 款冬花； 多糖； 微波提取； 抗氧化活性 　　款冬花为菊科植物款冬（Tussilagofar-fara）的干燥花蕾，为常用中药材之一，具有润肺止咳、化痰平喘之功效[1]，其主要有效成分为萜类、黄酮、生物碱、有机酸和精油等[2-5]。近年来研究发现款冬花中有效成分多糖具有一定的抗肿瘤作用[6-7]，因而对其进一步开发研究，具有广阔的应用前景。 　　目前，关于款冬花多糖的提取研究，主要采用传统水提、超声提取的研究方法，而关于款冬花多糖微波提取的方法鲜有报道[8-12]。基于此，本研究利用微波提取技术[13-17]，对款冬花多糖提取工艺运用正交实验优化筛选，并以抗氧化性实验对提取的款冬花多糖进行活性研究，为款冬花的实际应用开发研究提供一定的科研基础和思路。 　　1 材料与方法 　　1.1 材料 于西安万寿路中药材批发市场自购款冬花实验药材，经陕西中医药大学生药教研室王继涛教授鉴定为菊科植物款冬（Tussilago farfara L.）的干燥花蕾。 　　1.2 仪器及试剂 UV-265型紫外分光光度计（日本岛津公司），AL204型分析天平（梅特勒-托利多仪器（上海）有限公司），中科中佳HC-3618R冷冻离心机DZF-602真空干燥箱（上海申贤恒温设备厂），微波炉美的EG823MF4-NA；旋转蒸发仪RE-52AA（上海嘉鹏科技有限公司）。乙醇、乙醚、丙酮、葡萄糖、苯酚、浓硫酸及其他试剂均为分析纯。 　　1.3 实验方法 　　1.3.1 原料的提取 取款冬花花蕾，于80 ℃烘箱中烘干，粗粉碎，过筛。按照1∶3（g/mL）条件用无水乙醚回流提取2 h，脱脂，在70 ℃烘箱中干燥后再按前面1∶3（g/mL）条件用85%乙醇回流提取2 h，以除去单糖等杂质，再在70 ℃烘箱中干燥备用。 　　1.3.2 单因素实验 取款冬花粉末，按照相关实验条件进行：以料液比1∶30（g/mL），设定微波功率为400 W，时间为5 min，并在不同料液比（1∶10、1∶20、1∶30、1∶40、1∶50、1∶60），不同微波功率（200、300、400、500、600、700 W），不同微波时间（3、4、5、6、7、8 min）下考察上述条件对款冬花多糖得率的影响。 　　1.3.3 正交实验 在上述实验的基础上，以料液比、微波功率、微波时间3个因素，按照L934设计三因素三水平实验，见表1。 　　表1 正交实验因素水平表 　　水平 A料液比（g/mL） B微波功率（W） C微波时间（min） 　　1 1∶20 500 5 　　2 1∶30 600 6 　　3 1∶40 700 7 　　1.3.4 款冬花多糖提取方法 取80 ℃下烘干的款冬花→粉碎后，过70目筛→脱脂及除去单糖等杂质→微波提取→抽滤，滤液测定多糖含量→Sevage法去蛋白→水相加入乙醇，4 ℃沉淀过夜→4 ℃冷冻离心，沉淀，依次用95%乙醇、无水乙醇、乙醚、丙酮洗涤3次→80 ℃真空干燥至恒重→款冬花多糖。 　　1.3.5 标准曲线的绘制及多糖提取率计算 精密称取葡萄糖标准品100 mg，至100 mL容量瓶中用蒸馏水溶解定容，摇匀，配成1 mg/mL的葡萄糖标准溶液。分别吸取2、4、6、8、10 mL葡萄糖标准溶液定容到50 mL，而后各吸取上述标准溶液1.0 mL置25 mL具塞比色瓶中，分别加新鲜配制的5%苯酚1 mL，98%浓硫酸5 mL，各自震荡摇匀，40 ℃水浴加热30 min，冷至室温，以蒸馏水为空白对照，490 nm处测定吸光度，以吸光度为纵坐标，葡萄糖浓度为横坐标，绘制标准曲线，得线性方程y=12.9083x+0.0077（r=0.9998）。精密吸取前述定容的款冬花多糖溶液1.0 mL，按照前法测定吸光度值，代入标准曲线计算多糖含量，按照下式计算多糖得率：款冬花多糖得率（%）=（提取液中多糖质量/原料质量）×100% 　　1.3.6 抗氧化性实验 分别配制50、100、200、400、800、960、1200 μg/mL不