肿瘤坏死因子tnf-a参与红核痛觉信号通路调控的机制-mechanism of tumor necrosis factor tnf - a participating in the regulation of red nucleus pain signal pathway.docxVIP

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肿瘤坏死因子tnf-a参与红核痛觉信号通路调控的机制-mechanism of tumor necrosis factor tnf - a participating in the regulation of red nucleus pain signal pathway

万方数据 万方数据 独创性声明 本人声明所呈交的学位论文是我个人在导师指导下进行的研究工作及取得 的研究成果。尽我所知,除文中已经标明引用的内容外,本论文不包含任何其 他个人或集体已经发表或撰写过的研究成果。对本文的研究做出贡献的个人和 集体,均已在文中以明确方式标明。本人完全意识到本声明的法律结果由本人 承担。 学位论文作者签名: 日期: 年 月 日 学位论文版权使用授权书 本学位论文作者完全了解学校有关保留、使用学位论文的规定,即:学校 有权保留并向国家有关部门或机构送交论文的复印件和电子版,允许论文被查 阅和借阅。本人授权青海大学大学可以将本学位论文的全部或部分内容编入有 关数据库进行检索,可以采用影印、缩印或扫描等复制手段保存和汇编本学位 论文。本论文属于:保密□不保密□(请在相应方框内打“√”),在 年解密 后适用本授权书。 学位论文作者签名: 指导教师签名: 日期: 年 月 日 日期: 年 月 日 青海大学硕 青海大学硕士学位论文 摘 要 摘 要 目的:脑组织红核(red nucleus,RN)基团肿瘤坏死因子 α(tumor necrosis factor-alpha,TNF-α)对于病理性疼痛的进展有十分重要的意义。本研究主要 探讨核因子(NF-κB)、胞外调节激酶(ERK)、p38 促分裂原活化蛋白激酶 (MAPK)及 c-Jun 氨基端激酶(JNK)在 TNF-α 诱导的机械性疼痛中所扮演 的角色,进而探讨红核肿瘤坏死因子 TNF- a 参与痛觉信号通路调控的机制。 方法: 1.大鼠红核插管术 将正常大鼠固定于脑立体定位仪上,参照大鼠脑定位图谱确定:一侧红核, 前囟后 5.9mm;矢状缝旁开 1.0mm;颅表深 6.9mm 进行红核插管,术后 2 天给 红核基团进行反复微量注射鼠源性重组 TNF-α(每天 20 ng,持续 3d)干预, 给药 3d 后的第 2d,大鼠对侧脚掌诱导出疼痛,而同侧未出现疼痛症状,且对 侧脚掌疼痛维持 24h 后消失。在同一红核基团再次注射 20ng TNF-α,30min 内 诱导出机械性疼痛,表明大鼠疼痛模型成功。 2.行为学及痛觉异常的测定 在实验前三天让所有大鼠熟悉实验环境,实验开始后将其放在金属网上盖 上有机玻璃罩,先适应 20 分钟左右后,然后用标准化的 von Frey 尼龙丝刺激 注射了 TNF-a 的大鼠红核对侧的脚掌外侧脚趾及边缘,使 von Frey 尼龙丝弯成 S 形或 C 形持续 7 秒左右后 ,观察其反应,大鼠如果在测定时间内有迅速缩足 或舔爪反应为阳性反应。同样利用相同方法刺激未注射 TNF-α 大鼠,则无上述 反应。 3.大鼠给药及免疫组化 建立好的模型大鼠用微量注射器通过红核给药,将 NF-KB 、 ERK 、 P38MAPK 及 JNK 的抑制剂分别注入核团后观察大鼠诱发机械性疼痛起始和维 持阶段的行为学变化,同时通过免疫组化方法进一步测定脑组织 NF-KB、ERK、 P38MAPK 及 JNK 的表达量。 I 4.统计分析:统计分析采用 Sigmastat 2.03 软件的 Two way RM ANOVA (Bonferroni t-test)方法。双因素方差分析用以分析不同组别的药物作用并对 其进行多重比较分析,P 0.05 被认为具有统计显著性。 结果:免疫组化结果显示:微量注射 TNF-α 后 1h 和 4h 其红核组织中 NF-κB、磷酸化 ERK 均显著增加;但磷酸化 JNK 仅在微量注射 TNF-α 4h 后才 显著增加,而 1h 后无显著增加;与其相反,磷酸化 p38 MAPK 在微量注射 TNF-α 1h 后增加而在 4h 后却没有明显变化。通过行为学观察证明,在对大鼠红核基 团注射 TNF-α30min 后,给予 NF-κB 抑制剂 PDTC,ERK 抑制剂 PD98059 和 p38 MAPK 抑制剂 SB203580 能够在 30min 便可抑制 TNF-α 诱导的机械性疼痛。 然而,JNK 抑制剂 SP600125 在给药后 1h 才能阻止 TNF-α 诱导的机械性疼痛。 在注射 TNF-α 4h 后,再注射抑制剂 PDTC、PD98059 或 SP600125 (不包括 SB203580),能够明显抑制 TNF-α 诱导的机械性疼痛。 结论:TNF-α 通过红核基团诱发的神经病理性疼痛中扮演着重要的角色, NF-κB、ERK 及 p38 MAPK 三条途径在 TNF-α 诱导的机械性疼痛的起始阶段 发挥着重要作用,而 TNF-α 诱导的机械性疼痛的维持阶段主要依赖于 NF-κB, ERK 及 JNK 途径活化而得以进行,但这一过程中不包括 p38 MAPK 途径。 关键词:红核 肿瘤坏死因子 核因子 大鼠

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