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微生物降解煤矿瓦斯研究 　　摘要：为降低煤井采矿区内瓦斯的浓度，采用微生物筛选的方法，通过使用甲烷配气代替煤矿瓦斯在实验室条件下研究了微生物降解煤矿瓦斯的影响各种因素。实验结果表明：降解甲烷微生物的最佳培养条件为：pH为6.5；温度为32 ℃；摇床转速为120 r/min；接种量为5%；氧气与甲烷浓度之比为1∶2。并且菌种在最优条件下，对于初始浓度为45.63%的甲烷气体，96h内的降解效率最高可达55.7%。 　　关键词：甲烷；微生物；降解；煤矿瓦斯 　　中图分类号：TD713.3 　　文献标识码：A文章编号2016 　　1引言 　　煤层瓦斯易燃、易爆，是矿井主要灾害之一，同时也是造成温室效应的主要成分，等量甲烷造成的温室效应约是二氧化碳的21倍[1，2]。目前，我国瓦斯的主要治理技术为矿井通风、矿井瓦斯抽放和“四位一体”的综合防范措施等物理方法[3～5]。但我国煤系地层的原始透气性差，致使原始煤层预抽难以实施，而且效果较差。1939年，法国著名煤化学家尤洛夫斯基提出利用特殊的甲烷氧化菌，降低煤井采空区内甲烷浓度，随后，各国的科学家相继进行了类似的研究，并且取得了一定效果[6～11]。甲烷氧化菌氧化甲烷的活性受外界条件影响较大，直接喷洒或钻井注入后需封矿，不利于煤矿正常生产和工作人员对其进行监测[12]，如果能在一种氧化甲烷的反应器内降解甲烷，可以做到边开采、边治理，不需要封矿处理，则有更大的实用性。Chris A. duPlessis、浙江大学的余海霞等利用实验室菌种、中国矿业大学的黄霞、陶秀祥和同济大学机械工程学院刘巍等从淮南潘一矿的土样和水样中筛选出的菌种接种自行设计的小型反应塔，选取不同填料进行对比，采用混合菌系，对挂膜条件进行优化，同时对各参数和性能进行了初步的探讨[13～15]。 　　微生物过滤治理瓦斯是降低瓦斯危害的新思路，该技术可在无需封矿的条件下实现边开采边净化，减少煤层开采时的瓦斯涌出量，降低瓦斯灾害的发生。并且生物滤塔内微生物的筛选和生长条件对其治理瓦斯效果有重大影响。 　　2材料与方法 　　2.1实验仪器 　　实验用到的主要仪器有：恒温摇床用来对液体培养基进行恒温振荡培养，扫描电镜用来观察甲烷氧化微生物的形态，气相色谱仪用来检测甲烷及其它气体含量，电热恒温鼓风干燥箱用来进行温度调节，电子分析天平用来精确配制培养及所需药品，净化工作台用来提供局部高洁净度工作环境，紫外可见分光光度计用来测定甲烷气体在水中的浓度。 　　2.2微生物生长的影响因素的研究 　　本实验采用的微生物为甲烷氧化微生物。把从土壤中取得的含有甲烷氧化微生物的样品经过预处理放到液体培养基中进行菌种的富集，在液体培养基中通入甲醇作为唯一碳源对甲烷氧化微生物进行培养，增加待分离甲烷氧化微生物的数量。然后对样品进行进一步的分离纯化，从而把甲烷氧化微生物分离出来。对甲烷氧化微生物逐步用高浓度的甲烷进行驯化，最终可得到能够降解高浓度甲烷的菌种。 　　菌种生长的影响因素对微生物生长影响很大，如pH值与微生物的生命活动与新陈代谢有着密切的关系，温度能影响微生物的代谢和生长速率，而氧气与甲烷浓度比对甲烷氧化微生物体系有很大影响等等，故分别对pH值、温度、氧气浓度、微生物接种量及摇床转速每个影响因素设置几组不同的实验，在保证菌种正常生长的情况下通入甲烷气体，使其浓度为20%，测定菌体的OD600值，从而探究出最优的微生物生长因素。 　　3结果与分析 　　3.1微生物生长的影响因素的研究 　　3.1.1pH值对微生物生长的影响 　　由图1可以看出，培养基的初始pH值对该甲烷氧化微生物的生长有很大影响，不同pH值下，甲烷氧化微生物的生长速度大不相同。对于本甲烷氧化微生物，当pH值为6.5时，菌体生长OD600的值达到最高。在pH值为5.0～6.5范围内，菌体的OD值总随着初始pH值的不断增大而增大。当初始pH值超过6.5以后，该甲烷氧化微生物菌体OD600值又不断下降。因此，在酸性范围内，该甲烷氧化微生物生长所需的最佳pH值为6.5，微酸性环境有利于生长。 　　3.1.2温度对微生物生长的影响 　　图2表明，本实验所设定温度范围内，都可观察到甲烷氧化微生物的生长以及甲烷氧化的发生，但适合本甲烷氧化微生物生长的最适温度为32 ℃。环境温度低于32 ℃时，温度越低，菌体生长OD600值也越小。而环境温度超过32 ℃后，温度越高，越不适合该甲烷氧化微生物的生长。因此，该甲烷氧化微生物最佳生长温度为32 ℃，高于或低于32 ℃都不利于甲烷氧化微生物的生长。目前一些主要瓦斯矿井的井下风流温度和地层温度，都不超出15～40 ℃范围，可供氧化甲烷菌生长。所以对于将该甲烷氧化微生物应用于实际成为可能