中药品质生物评价与控制的示例大黄分析-analysis of example rhubarb for biological evaluation and control of traditional chinese medicine quality.docx

成都中医药大学博士学位论文 成都中医药大学博士学位论文 摘 要 中药质量评价与控制一直是中药现代化研究的难点和热点。现行的以化学定性鉴别 与指标成分含量测定为主要内容的中药质量评价与控制模式，不仅难以客观有效地评价 中药质量，更难以反映其有效性和安全性。 为了寻求解决中药质量评价与控制问题的新突破，本文以临床常用且药效物质相对 明确的大黄为模式药，探索建立基于道地优级药材和生物效价检测的中药质量评价模式 和方法，重点解决构建中药质量生物评价体系的两个关键技术问题——“生物效价检测 方法的优选与验证（怎么比）”和“工作参照物的建立与标化（和谁比）”，为推动和规 范中药质量生物评价与控制的研究提供思路和技术参考。主要研究结果如下： 1. 采用超高效液相色谱法（UPLC），对比分析了掌叶大黄、唐古特大黄、药用大 黄和伪品大黄中蒽醌成分的含量并建立了化学指纹图谱。指纹图谱相似度分析表明，与 掌叶大黄相比，唐古特大黄相似度较低（0.35~0.65），药用大黄相似度较高（0.7~0.8）， 掌叶大黄自身相似度最高（0.8~0.97），但 2 份伪品与掌叶大黄相似度也较高（0.87、0.90）。 2. 筛选并建立了大黄的两种生物效价检测方法，致泻药效模型方法和生物热动力学 方法，两种方法的量效相关系数分别达到 0.987 和 0.991，平均可信限率15%，符合生 物检测精密度要求。其中生物热动力学方法在重复性、灵敏度、特异性、经济性和自动 化程度方面具有优势。采用生物热动力学方法检测大黄药材抑制大肠杆菌效价并进行聚 类分析，其中产于青海和川西高原的唐古特大黄单独成一类（活性强、含量高），大部 分产于甘肃东部的掌叶大黄样品聚为一类（活性、含量均中等），部分甘肃产掌叶大黄 和四川产药用大黄聚为一类（活性较低，但个别样品化学含量较高），2 份伪品蒽醌含量 超过药典限度 1 倍，但效价最低。 3. 考察并确定了生物效价检测用大黄工作参照物的植物来源和制备方法，制备参照 物 10 批，样品均匀度较好（RSD1.5%），批间变异波动小于 15%。以番泻苷 B 单体对 大黄参照物生物效价进行原始赋值，定义：1 U 大黄参照物与 0.1595 mg 番泻苷 B 的作 用相当。建立了包括药典常规-多指标成分含测-化学指纹图谱-生物效价-生物活性谱的 工作参照物标化规范。 4. 对模式药大黄的生物和化学评价方法进行对比分析表明，生物效价信息与全部化 i ii ii 学组分含量信息在整体上有显著正相关性（P0.01），两类方法具有较好的一致性和互 补性。本文以大黄为例，拟订了以生物检测为核心内容的、集药典常规-化学-生物检测 方法为一体的质量评价方法操作规程，初订了大黄抑制大肠杆菌效价限度为 350 U? g-1。 5. 将建立的生物评价方法用于大黄的稳定性影响因素研究，各因素影响程度：湿度 温度光照。化学指标不能准确反映生物效价的改变，在不同湿度和温度条件下，化学 指标没有生物效价敏感，在光照条件下，由于蒽醌成分对光敏感，可能过分表达了光照 对大黄稳定性的影响。 6. 试制了中药质量生物评价软件。该软件既提供了生物效价定量计算功能，还提供 了生物活性图谱分析和定性鉴别功能，可进行图谱特征参数提取和相似度计算，并增加 了斜度比例和质反应平行线二种生物效价算法，满足实际工作可能遇到的多种量效关系 计算要求。该软件采用模块化设计，支持功能拓展与自定义，方便不同生物评价方法的 开发。 上述研究结果表明，所建立的中药品质生物评价方法已初步显示出在大黄品质评价 中的作用和价值，该方法为其他有效物质不明确的中药质量控制和评价提供了新的思路 和技术参考。 关键词：大黄；质量控制；生物效价；道地药材；生物热动力学 PAGE PAGE iii ABSTRACT Quality control and evaluation is one of the most important and difficult issues for the modernization of Traditional Chinese Drugs (TCD). However, the current pattern of quality control for TCD, mainly focused on the qualitative and quantitative determination of chemical components, could assure neither the quality stability of TCD, nor the safety and efficacy. To find a breakthrough to the quality control