唑来膦酸预防兔激素性股骨头坏死中对mmpstimps系统影响的实验分析-effect of zoledronic acid on mmpstimps system in prevention of steroid-induced femoral head necrosis in rabbits.docxVIP

安徽医 安徽医科大学硕士学位论文 PAGE PAGE 1 缩略词表 英文缩写 英文全称 中文名 ANFH Avascular Necrosis of Femoral Head SANFH Steroid-induced Avascular-Necrosis 股骨头缺血性坏死 激素性股骨头坏死 of Femoral Head MPS Methylprednisone 甲基强的松龙 LPS Lippolysaccharide 大肠杆菌内毒素 MMP Matrix metallopmteinas 基质金属蚩白酶 MMP-2 Matrix metalloproteinases-2 基质金属蚩白酶-2 MMP-9 Matrix metalloproteinases-9 基质金属蚩白酶-9 TIMPs Tissue inhibitors of matrix metalloproteinase TIMP-1 Tissue inhibitors of matrix metalloproteinase-1 TIMP-2 Tissue inhibitors of matrix metalloproteinase-2 金属蛋白酶组织仰制剂 金属蛋白酶组织抑制剂-1 金属蛋白酶组织抑制剂-2 BPs Bisphosphonates 二膦酸盐 唑来膦酸预防兔激素性股骨头坏死中对 MMPs/TIMPs 系统影响的实验研究 摘要 目的 MMPs 及其特异性抑制因子 TIMPs 是参与降解包括骨在内的全身各种组织细 胞外基质的蛋白酶家族。已证实 MMPs /TIMPs 系统与激素性骨坏死的发生存在密 切关系。近年研究表明，治疗骨质疏松常用药，第三代二膦酸盐，唑来膦酸可以 抑制 MMP-2、MMP-9 mRNA 表达，降低 MMPs /TIMPs 比率，抑制骨基质降解。 那么，唑来膦酸是否可以通过对 MMPs /TIMPs 系统的作用来拮抗激素性股骨头坏 死，值得我们进一步探讨。在本实验中，我们对大量应用糖皮质激素的新西兰大 白兔，预防性给予唑来膦酸干预，通过蛋白质免疫印迹法（Western Blot），观察唑 来膦酸对兔股骨头骨组织 MMP-2、MMP-9、TIMP-1、TIMP-2 蛋白表达的影响， 评估唑来膦酸是否可以通过对 MMPs /TIMPs 系统的作用来预防激素性骨坏死，为 临床应用唑来膦酸预防激素性骨坏死提供实验依据。 方法 健康 28 周龄雄性新西兰大白兔 70 只，体重（3.0±0.3kg）。随机分为模型组 （Group A）组；唑来膦酸钠组（Group B）组；空白对照组（Group C）组， 其中 A 、B 组各 30 只、C 组 10 只。各组动物均以标准饲料适应性喂养 1 周后，A.B 组均经耳缘静脉注射 10μg/kg 大肠杆菌内毒素，于 24h 后臀肌注射 MPS 20mg/kg， 共 3 次，每次间隔 24h；B 组同时给予耳缘静脉注射唑来膦酸 100μg/kg，共 2 次， 每次间隔 4 周；C 组按同样的方法给予相同容积的生理盐水。注射后观察动物精神、 食欲、体重变化及对捕捉的反应,在激素末次注射 6 周未行双髋 X 线片及 MRI 检查， 观察兔股骨头影像及形态学改变；摄片后空气栓塞处死兔子、取双侧兔股骨头， 沿股骨头正中矢状面剖为两半，一半行石蜡包埋、切片，HE 染色，计算空骨陷窝 率，鉴定股骨头坏死情况。另一半股骨头骨组织提取骨蛋白，采用蛋白质免疫印 迹法（Western blot）测出 MMP-2、MMP-9、TIMP-1 和 TIMP-2 蛋白表达水平。 结果 6 周末，模型组（A）股骨头坏死率为 78.57%（22/28），唑来膦酸钠组（ B） 组 14.81%（4/27），唑来膦酸组股骨头坏死率远低于模型组，两组间具有明显差异 ( P＜0. 05)；A、B、C 三组兔股骨头骨组织中 MMP-2、MMP-9、TIMP-1、TIMP-2 的蛋白表达水平经 Western Blot 检测显示，模型组与对照组比较，MMP-2、MMP-9 蛋白表达增高，TIMP-1、TIMP-2 蛋白表达降低，差异有统计学意义(P＜0. 05) ;唑 来膦酸钠组与模型组比较，MMP-2、MMP-9 蛋白表达降低，TIMP-1、TIMP-2 蛋 白表达增加，差异有统计学意义( P＜0. 05) 。 结论 1.唑来膦酸能够有效预防兔激素性股骨头坏死的发生，通过拮抗了糖皮质激 素上调兔股骨头骨组织中 MMP-2、MMP-9 蛋白的表达作用和拮抗了糖皮质激素下 调兔股骨头骨组织中 TIMP-1、TIMP-2 蛋白的表达作用，使 MMPs /TIMPs 比值下 降而成为预防兔激素 性股骨头坏死发病机理之一；2.MPS 能上调