中药复方干预急性白血病干细胞flt3和n-ras基因mrna表达的分析-analysis of the effect of chinese herbal compound on mrna expression of flt 3 and n - ras genes in acute leukemia stem cells.docxVIP

（一）白血病干细胞的靶向治疗 28 （二）融合基因的靶向治疗 29 （三）FLT3 的靶向治疗 29 （四）RAS 癌基因靶向治疗 31 六、实验结果及分析 32 结 语 35 参考文献 36 综 述 44 致 谢 49 PAGE PAGE 10 引 言 急性髓细胞性白血病(acute myeloid leukemia，AML)是起源于造血干细胞的一 组造血系统的恶性疾病，其特征是在骨髓及其他造血组织中有广泛的白血病细胞异常 增生及浸润，导致正常造血功能衰竭，表现为正常造血细胞显著减少，临床主要表现 为发热、出血、贫血、肝、脾、淋巴结肿大。 在白血病患者体内存在一群白血病干细胞 (leukemic stem cell，LSC )，这些 恶性干细胞数目虽极少，但能自我更新，具有一定的分化能力，是白血病细胞存在和 不断增殖的根源，也是导致白血病治疗中耐药、缓解后复发的重要原因，对白血病的 发生和发展起着关键作用。因此，研究干预白血病干细胞的特异性靶向治疗药物已成 为近年来研究的热点。 FLT3 基因(FMS 样酪氨酸激酶 3，fms-like tyrosine kinase-3)是 III 型酪氨酸 激酶家族成员的原癌基因，其蛋白产物属于细胞受体，定位于细胞膜上[1]，参与造血 干细胞的更新和定向分化。在正常人骨髓中，FLT3 的表达仅限于 CD34+干/祖细胞， 该受体与多种胞浆蛋白作用，介导一系列细胞内信号传导，导致细胞增殖和分化[2]， 在髓系造血细胞和 B 淋巴系造血细胞均有表达[3,4]，在 70%～100%患者白血病细胞上有 FLT3 过度表达，FLT3 的异常高表达或持续激活可能在白血病的发病机制起到了一定 的作用，目前不断探寻新的选择性 FLT3 抑制剂已成为白血病靶向治疗的热点之一。 Ras 癌基因是一个普遍存在的真核基因家族，其命名来自大鼠肉瘤( rat sarcoma) 的字首，1964 年首次从大鼠肉瘤的急性逆转录病毒(Harvey rat sarcoma virus 和 Kister rat sarcoma virus)中分离出来。Ras 癌基因可分为 N-ras, K-ras 和 H-ras 三类，在造血系统恶性疾病中 N-ras 癌基因是 Ras 癌基因突变最高的一种，突变率达 90%以上[5]，N-ras 突变为常见染色体突变，使信号传导异常而致细胞的恶性转化，还 可导致造血祖细胞的增殖优势及分化功能丧失。 中药复方治疗急性白血病在我院应用三十余年，取得了很好的临床效果。本研究 旨在通过细胞培养及 RT-PCR 方法观察中药复方干预急性白血病干细胞 FLT3 和 N-ras 基因 mRNA 的表达，以进一步探讨中医药靶向干预急性白血病干细胞的作用机制，为 中医药在靶向调控白血病干细胞方面治疗白血病提供思路。 临床研究 一、研究对象 本实验研究对象所有病例取自山东中医药大学附属医院血液科、山东大学齐鲁医 院血液科 2007年9 月-2008 年 12 月期间收治的住院或门诊 AML 初治和复发患者 50 例，其中男 30 例，女 20 例，年龄分布从 6 岁～83 岁，中位数年龄 44.5 岁。50 例患 者经骨髓细胞形态学确诊为 AML。FAB 分型 M1 5 例，M2 15 例，M4 9 例，M5 21 例。 二、诊断标准 诊断及疗效标准参照 FAB 和张之南主编《血液病诊断及疗效标准》[6]，符合上述 标准的初诊和复发患者，精神病患者、合并严重心、肝、脑、肾以及其他造血系统疾 病者、怀孕及哺乳期妇女不予选择。 FAB 急性非淋巴细胞白血病的形态学分型诊断标准： M0（急性髓细胞白血病微小分化型）：骨髓原始细胞30%，在光镜下类似 L2 型 细胞。核仁明显。胞浆透明，嗜碱性，无嗜天青颗粒及 Auer 小体。髓过氧化物酶（MPO） 及苏丹黑 B 阳性＜3%。在电镜下，MPO 阳性，CD33 或 CD13 等髓系标志可呈阳性。 淋巴系抗原通常为阴性，血小板抗原阴性。 M1（急性粒细胞白血病未分化型）：原粒细胞（I 型+II 型）占骨髓非红系细胞 的 90%以上，至少 3%细胞为过氧化物酶染色阳性。 M2（急性粒细胞白血病部分分化型）：原粒细胞（I 型+II 型）占骨髓非红系细 胞的 30%～89%，单核细胞＜20%，其他粒细胞＞10%。M2a 的染色体有 t（8；21）易 位，可查到 AML1/ETO 融合基因。 M3（急性早幼粒细胞白血病）：骨髓中以多颗粒的早幼粒细胞为主，此类细胞在 非红系细胞中≥30%。可查到染色体 t（15；17）易位和 PML/RARα融合基因。 M4（急性粒-单核细胞白血病）：骨髓中原始细胞占非红系细胞的 30%以上，各 阶段粒细胞占 30%～80%